Выращивание чистых культур туберкулезной палочки

Туберкулезные палочки в посевах патологического материала довольно трудно выделяются на искусственных средах, медленно развиваются, и культуры их появляются на 3 — 4-й неделе. Сильно мешает развитию туберкулезной палочки в культурах вторичная бактериальная флора, обычно менее прихотливая и быстро растущая. Для выращивания туберкулезных палочек и выделения их в чистых культурах в нашем институте свыше 20 лет пользуются обработкой материала серной кислотой по Левенштейну-Сумийоши в модификации Гона и посевами материала на специальных яичных средах Дорсэ, Любенау и нашего сотрудника И. С. Виноградова.

Обработка материала по Гону

Гной в количестве 3 — 5 см3 наливают в цилиндр с притертой пробкой:

  1. доливают 10 см3 10 — 15% раствора серной кислоты и встряхивают до гомогенизации в течение 15 — 20 минут;
  2. центрифугируют в течение 5 минут;
  3. жидкость сливают, а осадок размазывают тонким слоем и засевают (без промывания) на яичную среду (по поверхности).

Время воздействия серной кислоты (обработка и посев) не должно превышать 20 — 30 минут.

Плотные питательные среды для посева туберкулезной палочки

Яично-картофельная среда И. С. Виноградова:

  1. мелко нарезанный картофель варят с двойным количеством воды до полного разваривания;
  2. отвар фильтруют через двойную марлю и стерилизуют в автоклаве в течение 20 минут при 120°;
  3. затем к двум частям яичной массы (желток и белок) добавляют одну часть картофельного отвара и 5% глицерина;
  4. хорошо перемешанную смесь профильтровывают через марлю, разливают по пробиркам и в косом положении подвергают свертыванию в специальном аппарате при прогревании.

Среда Любснау: к свежему яйцу (белок и желток) прибавляют 1 часть 5% глицеринового бульона, смесь взбалтывают в колбе с бусами до гомогенизации, затем профильтровывают через марлю и разливают по 5 см3 в пробирки, которые в косом положении прогревают в аппарате свертывания.

Среда Дорсэ: к свежему яйцу (один желток) прибавляют 1 часть 5% глицеринового бульона, затем взбалтывают в колбе с бусами до гомогенизации, профильтровывают через марлю и разливают по 5 см3 в пробирки, которые в косом положении прогревают в аппарате свертывания.

Общие указания по приготовлению, свёртыванию и хранению сред

  1. Посуда должна быть стерильной. Яичную массу смешивают в стерильной колбе с бусами.
  2. Процеживание яичной массы и разливку по пробиркам производят через стерильную марлю, асептично.
  3. Дробное свертывание сред в специальном аппарате производится в течение 3 дней: 1-й день при температуре 90° — 1 час, 2-й день при 70° — 1 час, 3-й день при 70° — 1 час. Во избежание подсыхания на второй день свертывания сред в пробирки доливают 1 — 2 см3 5% глицеринового бульона.
  4. После трехдневного свертывания среду для контроля ставят в термостат при 37,5 — 38° на 3 дня.
  5. Среды необходимо хранить в темном, чистом и прохладном месте.

Для выращивания туберкулезных палочек необходима постоянная температура 37 — 38° термостата; отклонение в ту или другую сторону неблагоприятно отражается на развитии туберкулезной палочки.

По такой методике, как показали наши исследования (И. С. Виноградов, А. Н. Советова, А. А. Городкова, Н. М. Соколова), а также исследования других советских авторов (Ф. М. Акопова, Р. Т. Баум, Е. Иванова и др.), из гноя больных костно-суставным туберкулезом получают культуры туберкулезной палочки в 60 — 70% случаев.

А. А. Городкова, наблюдая за ростом туберкулезной палочки на плотных средах, установила, что методом микроскопического исследования посевов можно обнаружить микрокультуры туберкулезных палочек уже на 6 — 8-й день.

Для этого с места посева патологического материала на плотные среды берут частицу петлей, внося в капельку воды на предметном стекле, растирают, подсушивают, фиксируют и окрашивают по Циль-Нильсену. Обилие кислотоупорных палочек свидетельствует о развитии туберкулезных палочек, об их микрокультурах.

Отсев на свежие среды позволяет быстрее получить видимый рост в культурах.


«Костно-суставной туберкулез», П.Г.Корнев

← Назад
Вперед →