Окраска гистологических срезов

  1. Окраска гематоксилин-эозином

    Гистологический срез красят в растворе гематоксилина 10 — 30 минут (иногда до 2 — 3 часов), затем 5 — 10 минут промывают в воде, диференцируют в 1% растворе солянокислого — спирта, снова промывают водой, подщелачивают нашатырным спиртом (1 — 2 капли нашатырного спирта на 10 см3 дестиллированной воды) до полного посинения, повторно промывают в воде, наносят на предметное стекло, красят дополнительно 1 1/2 — 2 минуты эозином, промывают последовательно 70°, 96° и абсолютным спиртом, тщательно высушивают фильтровальной бумагой, просветляют ксилолом, покрывают тонким слоем канадского бальзама и заделывают под покровное стекло.

  2. Окраска по методу ван Гизона

    Срезы интенсивно окрашивают (перекрашивают) гематоксилином. Не диференцируя, споласкивают в воде и переносят в готовый раствор, состоящий из пикриновой кислоты (100 см3) и 1% кислого фуксина (10 см3). В растворе краски срезы находятся 3 — 5 минут, после чего их быстро промывают водой и обезвоживают спиртом (95°). Обезвоженные срезы просветляют и заключают обычным способом в канадский бальзам.

Импрегнация серебром по Футу

Импрегнация серебром по Футу (модификация И. С. Виноградова). Приготовленные для обработки срезы помещают в 1% раствор марганцовокислого калия на 5 минут. Промыв срезы в двух порциях воды, их помещают в 5% раствор щавелевой кислоты до побеления.

После этого срезы промывают в 3 — 4 порциях воды и помещают в 2% раствор азотнокислого серебра на 1 — 2 часа (в темноте). Вода во всех промывках применяется только дестиллированная; иглы для работы — стеклянные.

Вынув срезы, их быстро промывают в 3 порциях воды и помещают в раствор аммиачного серебра, который приготовляется следующим образом. В цилиндр наливают 10 см3 10% раствора азотнокислого серебра и прибавляют 10 — 12 капель 40% раствора едкого натра.

Выпавший осадок в том же цилиндре промывают дестиллированной водой до тех пор, пока промывная вода не будет оставаться совершенно прозрачной. Далее воду осторожно сливают, а остатки ее удаляют с помощью фильтровальной бумаги. К лишенному воды осадку прибавляют по каплям аммиак до полного его растворения, а затем разводят 20 см3 дестиллированной воды; полученный раствор фильтруют и сливают в стеклянную чашку с крышкой. В отфильтрованный раствор помещают приготовленные гистологические срезы, закрывают крышкой и ставят на 30 — 40 минут в темное место.

После этого срезы 2 — 3 раза промывают в воде, погружают на 5 минут в 5% раствор формалина, снова промывают водой, помещают на 10 — 15 минут в 1% раствор хлорного золота, опять промывают 1 — 2 раза водой и опускают на 15 — 20 секунд в 5% раствор гипосульфита, после чего длительно промывают в большом сосуде простой водой, докрашивают по ван Гизону и заключают обычным способом в канадский бальзам.

Предметные стекла для изготовления гистотопографических препаратов применяются размером 8,5 Х 8,5 см, для более крупных препаратов — 9 Х 12 см, иногда же 13 X 18 см. В качестве покровных стекол можно использовать пластинки слюды; для изготовления обзорного препарата срез покрывают обыкновенным стеклом.

Большие серийные срезы подвергают детальному изучению сначала под лупой, затем микросуммаром и, наконец, под микроскопом. Наиболее интересующие нас участки исследуются отдельно посредством получения более тонких срезов и производства диференцированной окраски (импрегнация серебром).

Полученные данные сопоставляются с рентгеновскими снимками, сделанными с препарата перед операцией, а иногда и после операции. Под конец устанавливается связь между найденными морфологическими изменениями и клинической картиной болезни.

Такой комплексный метод исследования, введенный нами в повседневную практику, позволил нам, с одной стороны, изучить эволюцию суставных туберкулезных заболеваний, а с другой — установить определенную точку зрения, позволившую объединить две, казалось бы, различные формы проявления туберкулеза — костный и суставной — в один общий, закономерно текущий процесс.

В связи с этим мы подошли с собственной точки зрения и к вопросу о классификации, так различно решавшемуся на протяжении более 100 лет.

«Костно-суставной туберкулез», П.Г.Корнев

Вперед →