Эритроцитарный антиген D: особенности обнаружения

Эритроцитарный антиген D: особенности обнаруженияАгглютинация на плоскости с моноклональным реагентом (тестирование на полные антитела)

Исследование на фактор Резус выполняется в освещенной лаборатории со стабильной температурой. Допускаются образцы, содержащие значительное количество эритроцитов (цельная кровь и эритроцитарные препараты)

Этапы тестирования:

  • на планшет помещают каплю реагента (около 0,1 мл) и каплю эритроцитов (примерно 0,03 мл);
  • образец смешивают с реагентом стеклянной палочкой;
  • планшет покачивают и оценивают результат.

Четкая агглютинация видна через 30 секунд, итог реакции — через 3 минуты.

Причины распространенных ошибок

  • биологические характеристики реагентов и используемых образцов («слабые» антигены, отсутствие агглютинатов α и β, «монетные столбики», наличие тепловых или холодовых антител, продуцированных посторонней сенсибилизацией, кровь со свойством «панагглютинации» и аутоагглютинации);
  • ошибки в технике действий (неправильная маркировка образцов, нарушение количественного соотношения ингредиентов);
  • низкое качество реагентов (бактериальное инфицирование, сыворотки с титром меньше 1:32).

Для всестороннего исследования на полные и неполные антитела требуется комплект реагентов анти-D IgG (идентификация неполных антител посредством пробы Кумбса или желатиновой конглютинации) и анти-D Супер (тестирование на полные антитела через агглютинацию на плоскости). Информация про реакцию Кумбса доступна по ссылке.

Оценка итога агглютинации:

  • отсутствие агглютинации — отрицательный резус-фактор (Rh-);
  • наличие реакции — положительный (Rh+).

Результаты реакции варьируются: + (сомнительная агглютинация), ++ (мелкодисперсная), +++ (среднедисперсная), ++++ (крупнодисперсная). Слабая агглютинация означает эритроциты с резусом Du (минорным антигеном). Для уточнения результата необходим реагент с IgG неполных анти-D антител.

Агглютинация с IgG неполных анти-D антител с применением высокомолекулярной субстанции

Способы исследования:

  • агглютинация на плоскости. Возможна ложная реакция высокомолекулярных веществ и резус-отрицательных эритроцитов. Для уточнения результатов используется высокомолекулярная субстанция (контрольный раствор) или тест с моноклональным реагентом с полными IgM антителами;
  • конагглютинация с желатином.

Пошаговый тест с желатином:

  • 0,05 мл образца крови или ½ сывороточной взвеси эритроцитов смешивают в пробирке с 0,1 мл 10%-ного раствора желатина;
  • вносят 0,1 мл анти-D реагента;
  • ингредиенты смешивают и подогревают на водяной бане до 37 ˚С;
  • добавляют 5-8 мл физраствора и аккуратно переворачивают пробирку (1-2 раза).

Агглютинация оценивается визуально. Равномерная окраска жидкости без агрегатов означает Rh-, четкие агрегаты — Rh+. Отсутствие агглютинации после внесения желатина подтверждает подлинность результата.

Параллельный контрольный тест с исследуемыми эритроцитами и желатином без анти-D реагента, либо со стандартными эритроцитами Rh+ и Rh- проводят для подтверждения достоверности анализа.

Фото: uni-ulm.de