Миеломные белки

Считается — и к этому есть основания, — что миеломные белки являются типичными представителями нормальных молекул иммуноглобулина гамма, причем каждый из них состоит из одинаковых молекул. Тогда безнадежны любые попытки определить аминокислотную последовательность иммуноглобулина гамма нормального животного — это в особенности относится к вариабельному участку последовательности, представляющему наибольший интерес. По всей вероятности, нормальный иммуноглобулин гамма представляет собой смесь многих тысяч разных молекул, различающихся по последовательности аминокислот в вариабельном участке.

Последовательность аминокислот в полипептидных цепях устанавливают с помощью ферментов, разрывающих цепи на фрагменты по 10—20 аминокислот в каждом. Затем определяют последовательность внутри каждого такого фрагмента. Разные ферменты разрывают исходную цепь в различных местах, и, сопоставляя аминокислотные последовательности фрагментов, полученных после обработки разными ферментами, можно найти перекрывающиеся участки. Это позволяет, комбинируя всевозможные варианты, определить полную последовательность (смотрите рисунок ниже).


Последовательность аминокислот в полипептидных цепях определяют
с помощью ферментов, которые разрывают цепь на короткие фрагменты,
расположенные вслед за определенной аминокислотой

Последовательность аминокислот в полипептидных цепях определяют с помощью ферментов, которые разрывают цепь на короткие фрагменты, расположенные вслед за определенной аминокислотой

Последовательность аминокислот внутри каждого фрагмента поддается прямому определению. Например, трипсин расщепляет цепь на фрагменты T1, Т2, Т3 и Т4. Другой фермент, химотрипсии, ту же цепь разрывает на фрагменты ХТ1, ХТ2 и XT3. Эти фрагменты перекрывают друг друга, что позволяет однозначно установить последовательность фрагментов и как следствие полную последовательность аминокислот в цепи.


В чистом белке все молекулы имеют одинаковую последовательность аминокислот, в которую укладываются аминокислотные последовательности всех полученных фрагментов.

Легко видеть, что применение этого метода к смеси разных белков, слегка различающихся по своим аминокислотным последовательностям, может дать только безнадежную путаницу. Однако результаты работы с миеломным белком позволяют прийти к заключению, что молекулы антител кроме вариабельных участков содержат также участки с постоянной последовательностью, и, может быть, стоит попытать счастья, работая с этой неизменной частью молекулы. Такие опыты были поставлены.

Смотрите далее — Результаты опытов с участками молекул с постоянной последовательностью


«Молекулы и клетки», под ред. акад. Г.М.Франка

Вперед →