Эксперименты на ts-мутантах

В экспериментах на ts-мутантах ASV продемонстрирована прямая функциональная зависимость между активностью вирусспецифической протеинкиназы, фосфорилированием и морфологической трансформацией.

В экспериментах на ts-мутантах RSV и FSV выявлена температурная чувствительность вирусных киназ и фосфорилирования [Sefton В. М. et al., 1979; Lee W. H. et al., 1980; Pawson T. et al., 1980; Oppermann H. et al., 1981; Sefton В. M. et al., 1982]. Таким образом, как киназная активность онкобелков, так и фосфорилирование являются обратимыми процессами.

При исследовании дефектных по трансформации мутантов MuLV, как и других аналогичных мутантов ретровирусов, установлено, что синтез онкобелков в зараженных ими клетках практически не изменялся ни в качественном (состав пептидов), ни в количественном (размер) отношении, однако отсутствовало специфическое фосфорилирование по тирозину, которое, например, при трансформации MuLV возрастает в 6 — 12 раз [Rosenberg N. et al., 1980; Sefton В. M. et al, 1981; Reynolds F. H. et al, 1982].

Вместе с тем необходимо отметить, что, хотя некоторые онкобелки (p21ras Ki-MSV и Ha-MSV, P75gag-erb AEV, P90gag-myc СМII) фосфорилированы in vivo, выявить фосфокиназную активность у них in vitro не удалось [Sliih Т. V. et al, 1982].

Интересно, что клетки, трансформированные вирусом саркомы обезьян (SSV), экспрессируют белок с молекулярной массой 115 000 (р115), фосфолирирующийся in vivo и in vitro по остаткам тирозина [Born М, Von der Helm К., 1983]. Для выявления в клетках сарком человека протеинкиназ, родственных р115 SSV, обрабатывали лизаты опухолевых клеток человека козьей антисывороткой к SSV и к иммунопреципитату добавляли 32[Р]-у-АТФ.

Таким способом были обнаружены фосфорилированные белки (по остаткам тирозина и серина) с молекулярными массами 120 000 и 130 000 в культурах клеток дерматофибросарком и ретикулосарком человека. Эти же белки также определялись в свежем опухолевом материале фибросарком.

Наконец, следует обратить внимание на то, что помимо фосфопротеинкиназной активности, с некоторыми онкобелками ассоциированы другие ферментативные активности. Например, белок p21ras Ha-MSV может связывать гуаниловые нуклеотиды (ГДФ и ГТФ) и, кроме этого, с ним ассоциирована лактатдегидрогеназная активность [Anderson P. et al, 1979; Scolnick E. M. et al, 1979; Papageorge A. et al, 1982].

С pp60src связана также глицеринкиназная активность, которая ингибировалась сывороткой TBR, содержащей антитела к pp60src [Graziani Y. et al., 1983]. Генеттичские доказательства того, что глицеринкиназная активность ассоциирована с pp60src, получены в опытах с td-мутантом RSVNY68.

Как глицерин-, так и протеинкиназная активности из клеток, трансформированных td-мутантом RSVNY68, были в 6 — 9 раз ниже по сравнению с таковыми из клеток, трансформированных вирусом дикого типа. Однако функциональное значение всех этих ферментативных активностей пока не выяснено.


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко

← Назад
Вперед →