Локализация трансформирующих белков в клетках - «Мед Читалка»

Локализация трансформирующих белков в клетках

Исследования, посвященные определению локализации продуктов онкогенов ретровирусов в трансформированных ими клетках, имеют большое значение, поскольку они способствуют выяснению возможного механизма их действия.

Однако подобная информация пока явно недостаточна и касается в основном двух белков: pp60src RSV и P120gag-abl A-MuLV. Низкогликозилированный рр60 получен в очищенном (гомогенном) виде и достаточно хорошо изучен.

Считают, что он состоит из двух основных доменов:
первый (ММ около 15 000) расположен на NH2-конце и содержит серин; второй (ММ 25 000) — на СООН-конце обогащен тирозином и представляет собой активный центр фосфопротеинкиназы.

Белок pp60src синтезируется на свободных полирибосомах и переносится на клеточную мембрану [Kamine J, Buchnan J, 1978; Courtneidge S. A. et al, 1980; Sefton В. M. et al, 1981; Courtneidge S. A, Bishop J. M, 1982]. Этот белок обнаружен и в вирионах RSV [Owada М. et al, 1981].

С помощью иммунофлюоресцентной микроскопии, субклеточного фракционирования и электронно-микроскопической иммуноцитохимии показано, что pp60src ассоциируется главным образом с плазматическими мембранами (точнее, локализован в цитозоле вблизи от клеточной мембраны) клеток, трансформированных RSV.

Причем однотипные результаты были получены при использовании изолированных мембран как куриных фибробластов, так и клеток млекопитающих [Rohrschneider L. R, 1979; Courtneidge S. A. et al, 1980; Krueger J. G. et al, 1980; Pastan I. et al, 1980; Courtneidge S. A, Bishop J. M, 1982].

Установлено, что вновь синтезированный pp60src в основном связывается с двумя клеточными фосфобелками рр50 и рр90 (рр50 фосфорилирован по серину и тирозину, а рр90 — только по серину) с образованием нестабильного короткоживущего комплекса [Courtneidge S. A. et al, 1982; Brugge J. S. et al, 1983].

Период его полураспада варьирует от 9 до 15 мин в трансформированных RSV клетках. Комплекс формируется в растворимой фракции клеток и при этом pp60src в составе комплекса не фосфорилируется по тирозину. На основании этих данных можно предполагать, что два клеточных белка могут играть определенную роль в процессинге молекул pp60src до ассоциации последнего с мембраной.

Итак, цитоплазматический комплекс, содержащий pp60src, рр50 и рр90, может быть переносчиком, с помощью которого pp60src достигает плазматической мембраны. Вполне возможно, что перенос других белков может осуществляться таким же способом.

Белок pp60src располагается внутримембранно, и его связь осуществляется через гидрофобный домен, локализованный, вероятно, на NH2-конце pp60src. Эта связь достаточно прочная, устойчивая к действию хелатных агентов и растворов с высокой ионной силой.

Помимо этого обнаружены значительные количества (около 15 — 20 %) pp60src и связанной с ним киназной активности на внешней поверхности эмбриональных фибробластов цыплят и мышиных клеток, трансформированных RSV. 7% этого белка и киназной активности определялось во внеклеточной среде, что не наблюдалось в случае других онкобелков [Barnekow A. et al, 1981].


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко