Нарушение системы микрофиламентов
Очевидно, существует два раздельных и независимых типа взаимодействия pp60src в бляшках адгезии. На основании представленных данных предполагают, что отсутствие определенной структуры в микрофиламентах является фактором, обусловливающим нерегулируемый рост. Следовательно, одна из характерных особенностей трансформации клеток под действием RSV — это нарушение системы микрофиламентов.
Поскольку актин, как отмечалось, является одним из белков, ассоциированных с этими структурными элементами клетки, D. P. Witt и соавт. (1983) изучили его изменения после заражения RSV. Актин существует в трех изомерных формах: α, β и λ.
Обнаружено, что в трансформированных клетках резко уменьшается количество только α-изоформы, а содержание двух других форм не изменяется. При этом α-форма ассоциирована с цитоскелетом и сохраняет способность связываться с ДНКазой I.
Уменьшение количества α-актина — процесс обратимый, он связан с трансформированным фенотипом, что было показано в экспериментах с ts-мутантом RSVNY68. Изменения в содержании α-актина обусловлены снижением скорости его синтеза, а не являются результатом повышения уровня деградации.
Итак, pp60src в основном локализуется в бляшках адгезии. L. Rohrschneider и М. Rosck (1983) исследовали несколько мутантов RSV, которые индуцировали различные виды трансформированного фенотипа. Оказалось, что повышение уровня фосфотирозина в винкулине недостаточно для того, чтобы вызвать исчезновение фибрилл и не зависит от потери клетками фибронектина.
Но в то же время увеличение количества фосфотирозина связано со способностью клеток к росту в мягком агаре. Таким образом, связывание с бляшками адгезии и активность тирозинспецифической киназы, вероятно, представляют собой две независимых функции белка pp60src.
При использовании «спасенных» мутантов RSV (rASV) получены дополнительные факты, в некоторой степени объясняющие взаимосвязь pp60src с онкогенезом. В этом отношении особый интерес представляют два таких мутанта 1702 и 157, продукты трансформирующих генов которых имеют молекулярные массы соответственно 56 000 и 62 500.
У обоих белков выявлен дефект NН2-концевой части, осуществляющей, как предполагают, взаимодействие с плазматической мембраной. Действительно, эти белки в отличие от pp60src дикого типа RSV (связан с мембранами более чем на 80%), определялись как растворимые цитоплазматические белки, т. е. их взаимосвязь с мембранами была резко нарушена.
Вместе с тем, несмотря на это, практически не изменялся трансформированный фенотип куриных фибробластов в системе in vitro, трансформированных этими изолятами 1702 и 157 по сравнению со свойствами таких же клеток, но трансформированных RSV дикого типа. Однако мутант 1702 rASV проявлял слабые бластомогенные свойства in vivo по сравнению с RSV и другими вариантами rASV, которые обычно вызывали летальные для цыплят малодифференцированные саркомы.
Опухоли же, индуцированные вирусом 1702, не приводили к гибели птиц и представляли собой регрессирующие дифференцированные саркомы [Krueger J. G. et al., 19821. Следовательно, нельзя исключить, что NH2-конец pp60src ответствен за связь с плазматической мембраной и этот контакт может быть одним из факторов, определяющих туморогенность in vivo.
В последующем был получен вариант «спасенного» rASV методом кокультивирования этого вируса с клетками крыс и коз, трансформированных RSV. Два типа восстановленных таким способом rASV в фибробластах млекопитающих и кур синтезировали pp60src, который локализовался на ядерных и околоядерных ретикулярных мембранах и практически отсутствовал в плазматических мембранах в отличие от src-белка RSV дикого типа. Детальный анализ трансформирующих белков этих двух типов rASV после обработки их протеазой V8 выявил отсутствие некоторых пептидов, локализованных на NH2-конца [Krueger J. G. et al., 1980; Garber M. B. et al., 1982].
Продукт онкогена abl A-MuLV — P120gag-abl — локализуется в основном на поверхностных мембранах трансформированных клеток, но вместе с тем существенно отличается по своим свойствам от других белков клеточной поверхности. Этот белок прежде всего не гликолизирован (поэтому практически не метится предшественниками углеводов), чувствителен к перевариванию экзогенными протеазами, не подвержен действию эндоглюкозидазы II, не йодируется с помощью лактопероксидазы [Witte О. N. et al, 1979; Boss М. А. et al, 1981].
Предполагают, что уникальные антигенные детерминанты P120gag-abl, расположенные на наружной поверхности клеток, вероятно, играют основную роль в процессе трансформации лимфоидных клеток. В связи с этим штамм A-MuLV (PI20), по-видимому, в равной мере трансформирует как фибробласты, так и лимфоидные клетки, в то время как мутант A-MuLV (Р90) трансформирует преимущественно лимфоидные клетки.
С помощью моноклональных антител методом непрямой иммунофлюоресценции было показано, что P120gag-abl и винкулин расположены в одних и тех же бляшках адгезии аналогично распределению pp60src в куриных фибробластах, трансформированных RSV [Rohrschneider L. R., Najita L. М, 1984]. Таким образом, трансформирующий потенциал белков ретровирусов с фосфопротеинкиназной активностью вероятнее всего может проявляться по сходным механизмам.
Что касается других трансформирующих белков, то, например, в отношений продукта онкогена ras р21 вирусов саркомы Харви и Кирстен с помощью моноклональных антител были подтверждены данные о локализации этого белки на внутренней мембране трансформированных клеток [Furth М. Е. et at, 1982].
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
