Сравнительное изучение трансформированного фенотипа
Сравнительное изучение трансформированного фенотипа, индуцируемого в эмбриональных фибробластах кур, кошек и мармозеток различными онкогенами ретровирусов (RSV, FSV, PRCII, PRCIIp и Y73, AEV, 2 штаммами FeSV и SSV) показало, что RSV и штаммы Шнайдер — Тилен FeSV обладают наиболее сильно выраженными трансформирующими способностями, вызывая наибольшие изменения исследованных признаков [Friis В. R. et al., 1981; Guedyn J. С., Martin G. S., 1982].
Выделены ts-мутанты RSV по гену src, обладающие киназной активностью, которые влияли лишь на некоторые из перечисленных фенотипических проявлений трансформации [David-Pfeuty Т., Singer S. J., 1980; Barnekow A. et al., 1981; Oppermann H. et al., 1981; Ziemiecki A. et al., 1981]. Ts-мутанты удобны также и тем, что при их переносе в условия разрешающей температуры в них можно четко контролировать проявление отдельных признаков трансформации, непосредственно связанных с функционированием гена src.
Так, морфологические изменения начинаются через 15 мин, в это же время обнаруживается фосфопротеинкиназная активность pp60src, пик которой приходится на 60-ю минуту. Все другие признаки трансформации проявляются позднее, например, пик индукции синтеза ДНК на 12-м часу, повышенный перенос глюкозы и продукция активатора плазминогена через 3 ч с пиком на 12-м часу и т. д.
Только ранние признаки трансформации возможны в отсутствие синтеза pp60src.
Наиболее четко действие pp60src проявляется в отношении морфологии клеток: изменяется их внешний вид, нарушается сеть актиновых волокон, пучков микрофиламентов и организация микротрубочек, на дорсальной поверхности клеток образуются специфические структуры, содержащие белки цитоскелета актин и α-актин, причем актин — в полиморфной форме.
Известно, что нормальные клетки адгезируют к субстрату с помощью специальных участков — фокальных адгезий и тесных контактов. По результатам непрямой иммунофлюоресценции src-белки различных ts-мутантов RSV и rASV локализуются в бляшках адгезии и зонах контакта клеток [Krueger J. G. et al., 1984].
В этих же участках концентрируются два клеточных белка — винкулин и α-актин. В процессе трансформации RSV эмбриональных фибробластов птиц и клеток млекопитающих не только исчезают эти фокальные участки адгезии, но и существенно изменяется распределение двух указанных белков. Сходные изменения наблюдаются и в клетках, зараженных ts-мутантами RSV.
В большинстве клеток с трансформированным фенотипом винкулин и а-актин частично ассоциированы с резко уменьшенным количеством участков фокальной адгезии, расположенных на периферии клеток. Подавляющая же масса этих белков обнаруживается в округлых агрегатах (розетках), которые, как правило, локализуются около внутренней поверхности клеток.
Кроме того интенсивно и строго локализованно накапливаются другие белки: миозин и тропомиозин, формирующие часть клеточного скелета возле плазматической мембраны. Повышается проницаемость плазматических мембран и с поверхности исчезает фибронектин. Белок pp60src, как уже отмечалось, локализуется где-то между цитоскелетом клетки и плазменной мембраной и один из белков этих структур, как полагают, винкулин, обусловливающий взаимодействие с субстратом и другими клетками, является мишенью действия pp60src.
Исходя из того, что каждый из ts-мутантов RSV вызывал свойственный только ему тип морфологической трансформации, можно предположить, что либо присутствие самого онкобелка в цитоскелете или в мембране клетки, либо действие его фосфопротеинкиназной активности, фосфорилирующей некоторые белки, в частности винкулин, является фактором, модифицирующим те структурные компоненты, которые отвечают за определенную морфологию клетки.
Вместе с тем необходимо обратить внимание на то, что морфологические изменения клетки в целом нельзя упрощать, поскольку в них, как известно, участвуют многие гены и ферменты и, возможно, трансформирующие белки действуют лишь на каких-то начальных этапах либо могут выполнять функцию механизмов, запускающих этот сложный многофакторный процесс.
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
