Фосфорилированный белок

Вслед за морфологическими изменениями, которые практически проявляются вскоре после внесения RSV в культуру клеток, обнаруживается фосфорилированный белок с молекулярной массой 36 000, повышается утилизация соединений, необходимых для жизнедеятельности клеток (глюкозы и др., смотрите таблицу Изменения, индуцируемые опухолеродным вирусом в трансформированных клетках), экспрессируется активатор плазминогена и индуцируется синтез клеточной ДНК.

Причем при содержании клеток в среде, бедной Са2+, синтез ДНК в нормальных условиях резко снижен. Важно, что инфекция диким типом RSV снимает этот блок, в то время как ts-мутанты RSV по гену src не обладают такой способностью [Durkin J. P. et al., 1981].

На этом основании предполагают, что pp60src позволяет клеткам преодолевать возникающий в их репродукции блок при переходе из фазы G1 в фазу S, который контролируется наличием в среде Са2+. Иными словами, нельзя исключить, что функция гена src может сводиться к контролю регуляций перехода клетоК из одной фазы цикла развития в другую.

Вместе с тем получены данные, свидетельствующие о том, что ген src осуществляет две различающиеся функции — трансформацию и стимуляцию клеточного роста. Эти функции не полностью координированы друг с другом и экспрессируются дифференцированно в зависимости от типа мутации в гене src.

Для их выявления особенно подходящими тест-системами являются клетки типа хондроцитов, нейроцитомы и нейроретины, которые размножаются крайне медленно. При заражении этих клеток RSV происходила как стимуляция их роста, так и трансформация. Важно отметить, что наблюдаемый эффект обусловливался именно наличием в RSV гена src, поскольку делеционные по этому гену td-мутанты RSV не стимулировали рост указанных клеток.

Получены td-мутанты (РА101 и РА104), которые поддерживали пролиферацию, но не вызывали трансформацию и, наоборот, не стимулировали рост клеток, однако индуцировали другие признаки трансформации [Тапаka A., Kaji А., 1979].

Причем в исследованных клетках фосфорилирование белков, в том числе и белка с молекулярной массой 36 000, было значительно снижено. Следовательно, митогенная активность RSV, вероятно, не требует существенного повышения фосфопротеинкиназной активности pp60src.

Вообще, о корреляции между способностью pp60src фосфорилировать белки-мишени по тирозину с состоянием трансформации клеток данные противоречивы. Правда, подавляющее число работ, результаты которых приводились выше, выполненных на различных тест-системах, свидетельствует о прямой корреляции между уровнем фосфопротеинкиназной активности и трансформированным фенотипом [Krzyzek R. A. et al., 1980; Rosenberg N. et al., 1980; Barbdcid M. et al., 1981; Beemon K., 1981; Lee F. et al., 1981; Oppermann H. et al, 1981; Bryant D. L., Parsons J. Т., 1982].

Однако в некоторых исследованиях на дефектных и ts-мутантах RSV наблюдалось отсутствие этой корреляции, указывающей на наличие других путей трансформации [Baltimore D, 1980; Reynolds F. U. et al., 1981; Weber M. J. et al, 1981]. Иногда же в клетках, трансформированных RSV, отмечалось дефосфорилирование двух мембранных белков с молекулярной массой 55 000 и 57 000.

Не обнаружили также связи между действием форболовых эфиров (обладающих, как известно, способностью индуцировать свойства, характерные для трансформации) и активацией, как предполагалось, pp60src [Bissel М. J. et al., 1980]. Оказалось, что они активировали другие киназы.


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко