Онкогены аденовирусов и их продукты - «Мед Читалка»

Онкогены аденовирусов и их продукты

Онкогены аденовирусов

В ранних исследованиях, посвященных физическому и транскрипционнему картированию геномов аденовирусов, были достигнуты значительные успехи, в частности, была определена локализация онкогенов аденовирусов человека и обезьян [Graham F. L. et al., 1975; Fujinaga К. et al., 1977; Пономарева Т. И. и др., 1979].

Установлено, что в клетках, трансформированных аденовирусами человека серотипов 2; 3; 5; 7 и 12, всегда присутствует только левый конец вирусного генома и выявляются антигены Т и TSTA, кодируемые, по-видимому, онкогеном и которые аналогично ранним белкам паповавирусов ответственны за трансформацию [Fujitlaga К. et al., 1977; Shiroki K. et al., 1977; Green M. et al., 1979].

В последующих работах было четко документировано, что левая часть генома (11 %) аденовируса, включающая две независимые транскрипционные единицы Е1А (1,5 — 4,5% генома) и Е1В (4,5 — 11 % генома), ответственна за инициацию и поддержание трансформации [Eb A. J. et al., 1980; Lemis J. В. et al., 1980; Byrde P. J. et al., 1982; Uo Y. S. et al., 1982]. Эта область определяет трансформацию клеток in vitro как высоко-, так и слабоонкогенными серотипами аденовирусов [Агеенко А. И, 1978]. Отмечена некоторая аналогия трансформирующих последовательностей оснований у аденовирусов человека и обезьян [Денисова Т. С., Гибадулин Р. А, 1982].

Выявленное сходство, вероятно, следует объяснить функциональными особенностями этого фрагмента вирусного генома, отвечающего у всех аденовирусов за индукцию трансформированного состояния клеток.

В опытах на ts- и делеционных мутантах аденовирусов было показано, что сегмент Е1А прямым или непрямым образом участвует в поддержании фенотипа трансформации.

Мутанты группы Е1В проявляли дефектность в отношении трансформации при обоих температурных режимах: пермиссивном и непермиссивном [Scolnick D, Anderson М. А., 1982; Но P. S. et al., 1982].

Предполагают, что участок Е1В вовлекается как в инициацию, так и в поддержание состояния трансформации. Во всяком случае экспрессия оперона Е1В в отсутствии функционирования Е1А недостаточна для полной трансформации.

Продемонстрировано, что только совместная трансфекция двух оперонов — Е1А и Е1В — приводит к опухолевой трансформации клеток [Elsen Р et al., 1983], а по данным К. Shiroki и соавт. (1984), для этого еще необходимы ЕЗ- и Е4-области вирусного генома. Кроме того, установлено, что продукт оперона Е1А является позитивным регулятором транскрипции раннего района Е2А, ЕЗ и Е4 генома аденвирусов. Последовательности, локализованные на 5´-концах ранних оперонов, содержат сайт, узнаваемый Е1А-белком [Weeks D. L., Jones N. С., 1983].

P. J. Byrd и соавт. (1982) исследовали способность клонированной ДНК высокоонкогенного варианта аденовируса человека серотипа 12 (А12) трансформировать клетки REB и BRK. С этой целью был проклонирован EcoRI-C-фрагмент ЛНК А12 (длиной 0 — 16,5 ед. карты) в обеих ориентациях 6 составе вектора рАТ153. Авторы сконструировали также рекомбинантные плазмиды, содержащие SaII-C-фрагмент (0 — 10,3 ед. карты), HinaiII-G- (0 — 6,8 ед. карты) и Accl-H- (0 — 4,7 ед. карты) фрагменты ДНК А12.

Оказалось, что трансформирующая активность сегмента EcoRI-C в составе плазмидной ДНК соответствовала таковой интактного вириона. Трансформированные линии клеток сохраняли измененную морфологию и экспрессировали вирусспецифические мРНК и Т-антиген при культивировании в течение как минимум года.

В ДНК трансформированных клеток in vitro и клеточных линий, полученных из опухолей А12, выявлены множественные последовательности, гомологичные фрагменту EcoRI-C А12. Трансформирующая активность ДНК остальных сконструированных плазмид оказалась сниженной.

Трансформированные клеточные линии были также изучены на способность индуцировать опухоли у бестимусных мышей и у хомяков. Клетки, трансформированные фрагментом EcoRI-C А12, или интактной ДНК А12, или вирусом А12, были туморогенными, а клетки, трансформированные сегментом HindHIG, не индуцировали опухоли [Jochemsen К. et al., 1982].

Для сопоставления этих данных с присутствием или отсутствием продуктов онкогенов А12, была проведена идентификация (с помощью иммунопреципитации) вирусспецифических Т-антигенов А12. В литически инфицированных клетках обнаружили белки с молекулярной массой 60000, 41 000, 19000, 14500 и 13500.

В клетках, трансформированных фрагментом EcoRI-C А12 или интактной ДНК А12, выявлены белки с массой 60 000, 41 000 и 19 000, а также 50 000 и 36 000. Клетки, трансформированные сегментом HindG, содержали два белка — с молекулярной массой 41 000 и 19 000.


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко