Сравнительное изучение структуры двух основных трансформирующих белков

Проведено сравнительное изучение структуры двух основных трансформирующих белков оперона Е1А у высокоонкогенного аденовируса человека типа 12 и у низкоонкогенных вариантов аденовирусов типов 5 и 7 [Perricaudet М. et al., 1980].

Для каждого серотипа оба полипептида имели одинаковые NH2— и СООН-концевые группы. Их различия сводились к внутренним делециям мРНК, связанным с неодинаковыми донорскими точками для сплайсинга. В молекулах полипептидов имелись отличия, указывающие на существование как вставок, так и делеций в геномах А7 и А12 до сравнению с таковыми А5.

Была исследована роль в опухолевой трансформации Т-антигенов, кодируемых ранним участком генома Е1 аденовирусов типов 5 и 12. Получены рекомбинантные плазмиды, содержащие последовательности, кодирующие как минорные, так и мажорные Т-антигены А5 (ММ 19 000 и 58 000) и А12 (ММ 19 000 и 54 000) в различных сочетаниях [Bernards R. et al., 1983].

Плазмиды использовали для трансформации клеток хомяка, трансформированные линии клеток тестировали на онкогенность на мышах линии nude. Оказалось, что высокой онкогенностью обладали только те варианты клеток, которые экспрессировали Т-антиген (ММ 54 000) А12 в любом сочетании. В то же время было показано, что белок с массой 19 000 играет аддитивную роль, так как его исключение из генома трансформированной клетки даже при наличии мажорного Т-антигена с массой 54 000 снижало онкогенность.

Выделен недефектный рекомбинант между слабоонкогенным аденовирусом типа 5 и ранней областью Е1А сильноонкогенного аденовирута типа 12 [Shiroki К. et al., 1983]. Показано, однако, что рекомбинант характеризуется меньшей онкогенностью, чем А12. Исследованы продукты трансляции онкогена аденовируса типа 2 при продуктивной инфекции и в трансформированных клетках in vitro.

С оперона El А на ранней стадии инфекции считываются 12S мРНК, направлявшая трансляцию белков с молекулярной массой 47 000 и 35 000, и 13S мРНК, которая направляла синтез белков с массой 53 000 и 41 000 [Spector D. J. et al., 1980]. На поздней стадии инфекции накапливается 9S мРНК А2, кодирующая белок с массой 28 000. Показано, что 13S мРНК А2 области Е1В направляет трансляцию белка с массой 15 000, 22S мРНК А2 — 52 000, a 9S жРНК А2 — 12 000 (попипептида IX).

Считывание 22S мРНК А2 происходит только на ранней стадии инфекции, 9S мРНК А2 — только на поздней, a 13S мРНК А2 синтезируется и на ранней, и на поздней стадии. В клетках, трансформированных аденовирусом типа 2, присутствовали 12S — 13S мРНК с оперона Е1А и 22S, 13S — с оперона Е1В. 9S мРНК А2 в этих клетках не обнаружена. С мРНК А2 Е1А транслируются белки (ММ 35 000 — 53 000), а с мРНК А2 Е1 В — белки с молекулярной массой 15 000 и 55 000, т. е. в исследованных клетках, трансформированных вирусом А2, экспрессировались белки, найденные на ранней стадии инфекции.

Показано, что Т-антиген А2 (ММ 15 000) ассоциирован с мембранами и трансформированных, и литически инфицированных клеток и высвобождается только при обработке детергентами [Persson Н. et al., 1982]. При трансляции ранней мРНК аденовируса типа 2 в бесклеточной системе с добавлением грубой микросомальной фракции определено, что этот белок связан с мембранной фракцией и in vitro.

Т. Matsuo и соавт. (1982) из клеток, трансформированных аденовирусом типа 2, выделили полипептиды с молекулярной массой 19 000, 20 000 и 53 000. Получены данные, свидетельствующие о том, что белок с массой 19 000 считывается с той же мРНК, что и белки с молекулярной массой 20 000 и 53 000, но с использованием иной рамки считывания.

По даными С. W. Anderson и соавт. (1984), ранняя область Е1В А2 (в пределах 2016 — 3500 п.н.) кодирует три белка с массой 57 000 (495 аминокислотных остатка), 18 000 (155 аминокислотных остатка) и 16 000. Причем первичная структура белка с массой 18 000 идентична таковой белка с молекулярной массой 57 000 по обоим концам молекулы.


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко

← Назад
Вперед →