Молекулярные механизмы интеграции провируса ДНК-содержащих опухолеродных вирусов и его транскрипция
В ранних экспериментах в клетках, трансформированных вирусами PY и SV40, были обнаружены вирусные геномы и их вирусспецифические РНК, которые содержали генетическую информацию для синтеза вирусспецифических белков. Эти информационные вирусные РНК включали субъединицы, комплементарные субъединицам вирусной ДНК.
Оказалось, что вирусные двойные спирали ДНК встраиваются в комплементарные участки клеточных ДНК, прочно с ними связываются и локализуются только в ядерных, хромосомных ДНК трансформированных клеток. В ДНК нормальных клеток они не определялись [Dulbecco R, 1966; Fujnaga К., Green М, 1966, 1967].
Предполагают, что процесс интеграции может быть специфическим и неспецифическим и, вероятно, он обусловливается как вирусными, так и клеточными (полимеразы, нуклеазы, лигазы и др.) ферментными системами. Этот аспект проблемы исследован еще явно недостаточно.
Вместе с тем многочисленные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что после физической интеграции при опухолевой трансформации вирусная ДНК становится частью клеточного генома, реплицируется вместе с ним и передается дочерним клеткам. В случае паповавирусов Т-антиген программирует репликацию интегрированной вирусной ДНК в самом начале S-фазы [Marchionni М. A, Roufa D. J, 1981].
Предполагают, что этот белок связывается с точкой начала репликации интегрированного провируса. Следовательно, репликация и экспрессия интегрированной вирусной ДНК могут частично или полностью регулироваться клеточными механизмами. Иными словами, вирусная ДНК воспринимается клеточными защитными механизмами как нормальная составная часть генетического аппарата клетки и производимые ею продукты, вирусспецифические белки, не влияют на жизнеспособность трансформированной клетки.
Транскрипция вирусных ДНК-копий начинается на клеточном или вирусном промоторе в зависимости от типа интеграции (полная копия генома вируса или его часть) и контролируется клеточными механизмами.
М. Green и соавт. (1981) показали, что в трансформированных А12 клетках крыс (линии F17, 8617, Т2С4, F4 и 5RK) синтезируются вирусные мРНК и Е1А 13S и мРНК Е1В 12S. Во всех клетках, кроме клеток линии 5RK, также происходил синтез мРНК Е1В 22S. Авторы считают, что трансформированный фенотип в клетках, пораженных аденовирусами, поддерживается их оперонами — Е1А и Е1В.
Вместе с тем интегрированная вирусная ДНК низко метилирована в опухолях, при этом заметной экспрессии ранней области E1 А12 не обнаружено. Степень метилирования вирусного генома возрастала по мере пассирования клеток опухолевых линий [Kuhlmann I, Doerfler W, 1983].
Установлено, что ДНК паповавирусов, экстрагированная из трансформированных клеток или очищенных вирусных частиц, также частично или полностью деметилирована [Graessman М. et al., 1983]. Однако к настоящему времени значение метилирования в транскрипции онкогенов ДНК-содержащих опухолеродных вирусов окончательно не выяснено.
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
