Количество копий генома
В клетках различных опухолей, индуцированных аденовирусами, а также в трансформированных ими клетках количество копий генома на клетку варьирует от 1 до 40. Как правило, аденовирусный геном интегрируется в интактном состоянии с колинеарным расположением множества копий, однако в клетках некоторых опухолей встречаются неполные копии генома [Schirm S, Doerfler W., 1981; Kuhlmann I., Doerfler W, 1982; Schulz M., Doerfler W, 1984].
В большинстве трансформированных аденовирусами клеточных линий геном вируса также не представлен целиком, причем различные его фрагменты могут присутствовать в клетках не в эквимолярных соотношениях [Green М. et al., 1981].
В клонированных опухолевых клетках сохраняется тот же тип интеграции вирусного генома, что и в исходных клетках. Не обнаружено корреляций между числом копий генома вируса А12 и содержанием цитоплазматических мРНК. Из этого следует, что регуляция экспрессии генов вируса А12 осуществляется по более сложному механизму, чем амплификация.
Степень метилирования интегрированной вирусной ДНК зависит от условий культивирования. В клеточной и аденовирусной ДНК отсутствуют специфические сегменты, по которым происходила интеграция [Kuhlmann I, Doerfler W, 1982]. В процессе субкультивирования в клетках некоторых опухолей, индуцированных вирусом А12, происходила потеря определенной части или всего генома вируса, что иногда выявлялось уже после первого пассажа.
В целом процесс такой утраты был поэтапным, наиболее стабильными при этом оказались левосторонние фрагменты ДНК вируса А12. Важно, что, несмотря на утрату всей вирусной ДНК, выявляемой с помощью различных молекулярно-биологических методов, клетки некоторых опухолей сохраняли трансформированный фенотип [Kuhlmann I, Doerfler W, 1983].
Аналогичная картина наблюдалась и в некоторых клетках опухолей, индуцированных паповавирусами, а также в клетках, трансформированных этими вирусами. Клетки-трансформанты, используемые для заражения и являющиеся исходно Т-антигензависимыми, после пролиферации в организме животного становились независимыми по Т-антигену [Seif R. et al., 1983].
Из каждой опухоли получено несколько линий клеток, которые анализировались на наличие вирусспецифической ДНК. Обнаружено, что некоторые опухолевые линии вообще не содержали вирусного генома, а в других произошла элиминация его отдельных фрагментов. Доказано, что при продуктивной аденовирусной инфекции также происходит интеграция вирусной ДНК в геном клетки-хозяина [Neumann R., Doerfler W, 1981].
Данные рестрикционного анализа свидетельствуют о том, что количество мест интеграции ограничено и все они в основном определяются в зоне повторяющихся последовательностей клеточной ДНК. С помощью меченых копий к отдельным фрагментам аденовирусной ДНК показано, что практически все сегменты вирусного генома присутствуют в рекомбинантной форме с клеточными последовательностями.
Методами молекулярной гибридизации изучены последовательности ДНК опухолеродного аденовируса обезьян SA7 (С8), присутствующие в трансформированных и опухолевых клетках [Gartel I. et al., 1983].
Геном клетки содержал или последовательности всего генома SA7 (С8), или левую концевую область — фрагмент Sa1IС — 19,5 % ДНК SA7 (С8). Число копий ДНК SA7 (С8) на клеточный геном составляло 2 — 3. По характеру интеграции вирусного генома в геном клетки SA7 (С8) подобен неонкогенным аденовирусам человека подгруппы С, но отличается от аденовируса типа 12.
Вопрос о наличии в вирусной ДНК специфического места для прикрепления к клеточной ДНК был исследован еще в ранних работах L. Т. Chow и соавт. (1975) с помощью рестриктаз и электронного микроскопа на модели полиомавирусов в сравнительном аспекте: при литической (продуктивной) инфекции и в процессе трансформации.
Полученные данные свидетельствуют о существовании нескольких мест прикрепления при продуктивной инфекции, которые соответствуют точкам 0,205; 0,248; 0,312 и, вероятно, 0,59 ед. карты. При разрыве молекулы ДНК SV40 в указанных точках синтез ранних белков продуктов А-онкогена, ответственных за трансформацию, невозможен.
Действительно, оказалось, что фиксация и разрыв ДНК SV40 при опухолевой трансформации происходили в области поздних вирусных генов внутри фрагмента С и прилегающего к нему фрагмента D (0,70 — 0,85 ед. карты) или в районе точки начала репликаци ДНК (0,67 ед. карты).
Связывание вирусной двуспиральной молекулы именно в этой точке с хромосомной ДНК обусловливает, по-видимому, и характерный спектр транскрибируемых вирусспецифических мРНК и соответствующих продуктов их трансляции, играющих, вероятно, первостепенную роль в поддержании трансформированного фенотипа клетки.
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
