Исследование на фактор Резус выполняется в освещенной лаборатории со стабильной температурой. Допускаются образцы, содержащие значительное количество эритроцитов (цельная кровь и эритроцитарные препараты)
Этапы тестирования:
- на планшет помещают каплю реагента (около 0,1 мл) и каплю эритроцитов (примерно 0,03 мл);
- образец смешивают с реагентом стеклянной палочкой;
- планшет покачивают и оценивают результат.
Четкая агглютинация видна через 30 секунд, итог реакции — через 3 минуты.
Причины распространенных ошибок
- биологические характеристики реагентов и используемых образцов («слабые» антигены, отсутствие агглютинатов α и β, «монетные столбики», наличие тепловых или холодовых антител, продуцированных посторонней сенсибилизацией, кровь со свойством «панагглютинации» и аутоагглютинации);
- ошибки в технике действий (неправильная маркировка образцов, нарушение количественного соотношения ингредиентов);
- низкое качество реагентов (бактериальное инфицирование, сыворотки с титром меньше 1:32).
Для всестороннего исследования на полные и неполные антитела требуется комплект реагентов анти-D IgG (идентификация неполных антител посредством пробы Кумбса или желатиновой конглютинации) и анти-D Супер (тестирование на полные антитела через агглютинацию на плоскости). Информация про реакцию Кумбса доступна по ссылке.
Оценка итога агглютинации:
- отсутствие агглютинации — отрицательный резус-фактор (Rh-);
- наличие реакции — положительный (Rh+).
Результаты реакции варьируются: + (сомнительная агглютинация), ++ (мелкодисперсная), +++ (среднедисперсная), ++++ (крупнодисперсная). Слабая агглютинация означает эритроциты с резусом Du (минорным антигеном). Для уточнения результата необходим реагент с IgG неполных анти-D антител.
Агглютинация с IgG неполных анти-D антител с применением высокомолекулярной субстанции
Способы исследования:
- агглютинация на плоскости. Возможна ложная реакция высокомолекулярных веществ и резус-отрицательных эритроцитов. Для уточнения результатов используется высокомолекулярная субстанция (контрольный раствор) или тест с моноклональным реагентом с полными IgM антителами;
- конагглютинация с желатином.
Пошаговый тест с желатином:
- 0,05 мл образца крови или ½ сывороточной взвеси эритроцитов смешивают в пробирке с 0,1 мл 10%-ного раствора желатина;
- вносят 0,1 мл анти-D реагента;
- ингредиенты смешивают и подогревают на водяной бане до 37 ˚С;
- добавляют 5-8 мл физраствора и аккуратно переворачивают пробирку (1-2 раза).
Агглютинация оценивается визуально. Равномерная окраска жидкости без агрегатов означает Rh-, четкие агрегаты — Rh+. Отсутствие агглютинации после внесения желатина подтверждает подлинность результата.
Параллельный контрольный тест с исследуемыми эритроцитами и желатином без анти-D реагента, либо со стандартными эритроцитами Rh+ и Rh- проводят для подтверждения достоверности анализа.
Фото: uni-ulm.de