Зачатки конечностей

Зачатки конечностей затем культивируют или на миллипористых фильтрах в соответствии с методикой Trowell, или путем погружения в медленно вращающиеся сосуды, заполненные питательной средой. Эксплантаты можно поддерживать жизнеспособными в виде культур по меньшей мере 5 — 6 дней, в течение которых они разовьются до стадии, соответствующей стадии развития in vivo за тот же срок.

Культивированные эксплантаты затем фиксируются, окрашиваются, просветляются и оцениваются по системе оценки, предусматривающей начисление баллов за наличие различных длинных костей и скелета лапы. Количество образовавшегося коллагена можно оценить количественно биохимически или путем микропланиметрии окрашенных срезов.

Эта система широко используется для опытов с тератогенными веществами, в отношении которых уже было установлено, что они вызывают пороки развития скелета, было показано, что применение тест-системы этого вида дает возможность получать воспроизводимые зависимости доза — эффект. Культуры зачатков конечностей мышей также можно использовать для оценки претератогенов, которые нуждаются в метаболических превращениях, для того чтобы стать эмбриотоксичными.

Были успешно применены три следующих метода:

  • зачатки конечностей были эксплантированы из эмбрионов, которые подвергались воздействию исследуемых веществ in vivo;

  • на нормальные зачатки конечностей в виде культуры воздействовали сывороткой крови животных, подвергнутых воздействию исследуемых веществ;

  • нормальные зачатки конечностей культивировали в присутствии системы, метаболизирующей лекарственные препараты, во время воздействия исследуемым веществом.

Последний способ напоминает тест Ames для выявления промутагенов. Использование системы с культурами клеток для оценки потенциальных тератогенов также было изучено.

«Клиническая фармакология при беременности», Х.П.Кьюмерле

← Назад
Вперед →