Биосинтез фосфолипидов (Правильно собранный аспират)

Правильно собранный аспират представлял собой вязкую, слегка пенящуюся жидкую массу серебристо-белого цвета.

Аспирированный материал немедленно обрабатывали или хранили при температуре — 20 °С не более 5 дней. После определения точного объема аспират гомогенизировали в тефлоновой ступке пестиком с 9 объемами изотонического раствора хлорида натрия до достаточной однородности.

Для удаления клеточных элементов гомогенат центрифугировали в течение 20 мин при 3000 об/мин. Амниотическую жидкость во время беременности и родов получали путем трансабдоминального амниоцентеза, трансвагинальной и трансцервикальной амниопункции, во время кесарева сечения, путем чрезматочной амниопункции.

Собранную амниотическую жидкость 20 мин центрифугировали при 3000 об/мин, для удаления клеточных элементов и немедленно обрабатывали или хранили при температуре —20 °С не более недели. Пробы, загрязненные кровью или меконием, исключали.

Определение фосфолипидов. ФЛ в сыворотке крови определяли методом, предложенным А. С. Бурковой, И. А. Шабановой (1972). Для определения фракционного состава ФЛ амниотической жидкости и фарингеальных аспиратов 5 мл подготовленного материала смешивали с равным объемом метанола и двумя объемами хлороформа.

Смесь встряхивали 12 мин, затем помещали в лед на 15 мин. Разделение фаз проводили центрифугированием смеси 15 мин при 3000 об/мин. Удаляли верхний и средний слой, а нижний, богатый липидами, переносили в пробирку.

Содержимое выпаривали под вакуумом досуха на водяной бане при температуре не выше 60 С. Пробирку с сухим липидным экстрактом ставили на 5—10 мин в лед. ПАФЛ определяли методом G. Gluck и соавт. (1967). Для этого в пробирку с сухим липидным экстрактом осторожно, по каплям вводили 0,75 мл холодного ацетона.

Смесь центрифугировали 2 мин при 3000 об/мин. Супернатант сливали в пробирку, а к преципитату добавляли 1 мл холодного ацетона, и оба компонента инкубировали при температуре — 4 СС в течение ночи. На следующий день супернатанты и преципитаты объединяли. Согласно данной методике, ФЛ преципитата представляют собой поверхностно-активную фракцию, а ФЛ супернатанта — неактивную.

Полученные после выпаривания сухие липидные экстракты растворяли в 50 мл хлороформа и наносили на предварительно активированную пластину.

«Синдром дыхательных расстройств и сурфактант легких у новорожденных», Н.И. Пузырева

Популярные статьи раздела