Продукт онкогена fos

Идентифицирован продукт онкогена fos вируса остеосаркомы мышей (FBJ). Им оказался фосфобелок pp55fos, который, однако, в отличие от других трансформйрующих белков фосфорилировался не по тирозину, а по серину [Curran Т., Teich N., 1982].

Все продукты слитных онкогенов ретровирусов С-типа птиц содержат разное количество пептидов, соответствующих структурным белкам вириона, но все они имеют в своем составе пептиды белка р19, локализованного на NН₂-конце гена gag (последовательность белков гена gag следующая: NH2-pl9 — р 12 — р27 — р15-СООН).

Вирусы сарком птиц, как уже отмечалось, имеют три слитных гена: fps, yes и ros. Ген fps в FSV кодирует слитный белок P140gag-fps, содержащий антигенные детерминанты белков р 19, р27 и р 15, но не имеющий детерминант генов env и pol [Pawson Т. et al., 1980, 1981; Lee W. H. et. al., 1981].

Белок P140gag-fps фосфорилирован по трем тирозиновым остаткам и одному сериновому. После действия протеазы р 15 или протеазы V8, когда образуются крупные пептиды, были более точно локализованы сайты фосфорилирования. NH-концевой участок P140gag-fps, содержащий gag-последовательности, имеет один фосфотирозин и несколько фосфорилированных сайтов, характерных для фрагмента gag.

В СООН-половине fps-специфического участка P140gag-fps индентифицированы два основных фосфотирозина и один основной фосфосерин. Если анализировали P140gag-fps, меченый in vitro в иммунных комплексах, то фосфорилировался лишь один из двух СООН-концевых тирозинов и в незначительной степени тирозин в gag-участке. Кроме того, выявлялся еще один фосфотирозин, фосфорилирование которого не происходило in vivo [Weinmaster G. et al., 1983].

Основной сайт фосфорилирования — это тирозин в положении 1073, который контролируется кодоном TAT [Weinmaster G. et al., 1984].

Следовательно, процессы фосфорилирования in vitro (в иммунных комплексах) и in vivo (в трансформированных клетках) различаются между собой. Сравнительный анализ фосфопептидов из трех вариантов клеток, трансформированных мутантами FSV, свидетельствует о том, что эти пептиды весьма сходны.

Консервативность этих пептидов позволяет предполагать, что они играют важную функциональную роль. При умеренной обработке иммунопреципитатов, содержащих P140gag-fps, трипсином образуются СООН-концевые фрагменты с молекулярной массой 45 000 и 29 000, которые продолжали сохранять фосфопротеинкиназную активность.

Полученные данные указывают на то, что домен фосфокиназы локализован на СООН-конце P140gag-fps FSV и фрагмент fps-участка необходим для экспрессии тирозинспецифической киназной активности [Weinmaster G, Pawson Т., 1982; Weinmaster G. et al, 1983].

В клетках, трансформированных вирусом PRCII, идентифицирован P105gag-fps, содержащий все пептиды, характерные для р19 и р27 и 40 % уникальных пептидов. P105gag-fps транслируется 28S РНК PRCII. По данным фингерпринтного анализа белки P105gag-fps из трансформированных PRCII клеток и синтезированные in vitro оказались очень сходными.

Однако в отличие от P105gag-fps, выделенного из клеток, белок, синтезированный в бесклеточной системе, не обладал фосфокиназной активностью [De Lamarter J. F. et al, 1981; Hirano A, Vogt P. K., 1981; Neil J. C. et al, 1981]. Установлено, что P105gag-fps является первичным продуктом синтеза гена fps вируса PRCII и около 50 % P105gag-fps модифицируется посттрансляционно с образованием Р110, который обнаруживался во фракции цитоскелета [Adkins В, Hunter Т, 1982].

С этой же фракцией в основном связана фосфокиназная активность, т. е, по-видимому, главным образом после процессинга она ассоциировала с Р110. Показано, что Р110 включает приблизительно в 10 раз большее количество ³²[Р], чем Р105, и содержит значительно большее количество фосфотирозина, чем Р105. В P105gag-fps PRCII отсутствует один из фосфотирозинов СООН-конца.

В составе Р110 обнаружены три дополнительных пептида, все содержащие фосфотирозин, т. е. дополнительное фосфорилирование по тирозину происходит в дискретных сайтах внутри Р110. Следовательно, клетки кур, зараженные PRCII, содержат две дискретные формы трансформирующего белка (Р105 и Р110), отличающиеся как структурно, так и функционально и присутствующие в молярном соотношении 1:1.

«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко

Популярные статьи раздела