Ген тимидинкиназы
D. A. Galloway и J. K. McDongall (1981) для идентификации онкогена HSV2 получили рекомбинантную плазмиду pBR322, содержащую фрагмент 0,58 — 0,62 ед. карты вирусного генома.
С помощью гибридизации с раздельными сегментами клеточной ДНК фрагмента 0,58 — 0,62 ед. карты было установлено, что изменение фенотипических свойств трансформированных клеток коррелирует с появлением в их геноме этой специфической области вирусного генома.
Во всех случаях плазмидная ДНК с онкогеном HSV2 содержалась в количестве не менее одной копии на клетку, а внутригеномное распределение вирусспецифических последовательностей варьировало в процессе пассирования трансформированных клеток in vivo. Клетки, трансформированные онкогеном HSV2, образовывали опухоли при трансплантации бестимусным мышам.
Ген тимидинкиназы (биохимически активные тимидинкиназные трансформирующие последовательности) локализован на физической карте HSV1 в пределах 0,300 — 0,313 ед., а у HSV2 — между 0,303 — 0,315 ед. карты [Reyes G. R. et. al., 1982]. Опыты с серией клонированных плазмид, содержащих фрагменты вирусных ДНК BamH 1 — 0 С делениями в гене тимидинкиназы, показали, что последовательность, определяющая стабильную биохимическую трансформацию, лежит в области 0,303 — 0,313 ед. карты (1600 нуклеотидов).
Обнаружено, что нетрансформирующая промоторная область гена тимидинкиназы, величиной около 250 последовательностей, содержит значительно больше консервативных участков расщепления, чем участок, кодирующий собственно фермент — тимидинкиназу. 95% последовательностей промоторных участков генов тимидинкиназы HSV1 и HSV2 были гомологичны.
Не менее 140, но не более 200 последовательностей 5´-концевой промоторной области гена тимидинкиназы необходимы для экспрессии этого гена. Для того чтобы в опытах по трансфекции достигнуть по крайней мере 10 % трансформирующей активности, необходима последовательность гена тимидинкиназы размером 1480 — 1540 нуклеотидов.
Биохимически трансформированные геном тимидинкиназы HSV1 и HSV2 клетки устойчивы к ингибирующему действию 1 мм тимидина, экспрессируют специфическую для HSV тимидинкиназную активность и продуцируют полипептид с молекулярной массой 39 000 — 40 000, характерный для вирусспецифического фермента [Kit S. et al., 1981; Reyes G. R. et al., 1982].
У HSV выявлено еще две ферментативные активности — ДНК-полимеразы и экзонуклеазы, ассоциированные, как считают, с первым ранним вирусным белком [Derse D., Cheng Y. С., 1981].
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
