Аминокислоты подвергающиеся фосфорилированию вирусспецифическими протеинкиназами

Определены аминокислоты, которые подвергаются фосфорилированию вирусспецифическими протеинкиназами.

У большинства онкобелков, выделенных из транс-формированных клеток, идентифицировано две фосфорилированные аминокислоты:
фосфотирозин и фосфосерин. Показано, что в системе in vitro фосфорилирование происходит в основном по тирозину, в то время как в системе in vivo, наоборот, серин преобладает над фосфотирозином или же фосфорилирование осуществляется как в случае P120gag-abl A-MuLV, серина, треонина и тирозина.

Практически во всех изученных системах идентифицированы пептиды, в которых локализуется фосфотирозин [Moelling К. et al., 1981; Sefton В. М. et al, 1981; Feldman R. A. et al, 1982]. Вместе с тем ферменты некоторых онкобелков в системе in vitro либо слабо фосфорилируют тирозин в составе тяжелых цепей иммуноглобулина (белок P68gag-ros UR2), либо вместо тирозина (белок P170gag-fms MD-FeSV) фосфорилируют серин и треонин, при этом в клетках, трансформированных MD-FeSV, уровень фосфорилирования P170gag-fms невысок [Barbacid М., Lanver А., 1981; Feldman R. A. et al., 1982].

Использовав протеазу V8 для обработки pp60src, удалось определить локализацию в этом белке аминокислот, которые подвергаются фосфорилированию.

Серин был обнаружен во фрагменте, составляющем 40%:
pp60src с MN2-конца, а тирозин находился во фрагменте, составляющем 60 % src-белка с СООН-конца.

Затем на ts-мутантах RSV, у которых в pp60src отсутствовали точки фосфорилирования по серину (в положении 17) и тирозину (в положении 416), было установлено, что фосфорилирование этих аминокислот не влияет на тирозинкиназную активность и трансформирующую способность pp60src [Gross F. R., Hanafusa H., 1983].

Показано, что С-концевые фрагменты pp60src и P90gag-yes могут функционировать как фосфотрансферазы, причем конформация каталитических доменов этих фрагментов обеспечивает защиту от протеолиза [Brugge J., Darrow D., 1984].

В продукте трансформирующего гена yesY73, P90gag-yes, идентифицировано два пептида, содержащих фосфотирозин. Один из них оказался идентичным пептиду, полученному из pp60src RSV после обработки его протеазой V8 [Collett М. S. et al., 1979]. Предполагают, что какая-либо закономерность локализации фосфорилирующегося тирозина отсутствует, поскольку он может находиться как внутри gag-фрагмента, так и в уникальной области слитных онкобелков.

На модели онкобелка P120gag-abl A-MuLV получены данные, свидетельствующие о том, что в иммунных комплексах фосфорилирование в основном ограничено NH2-концевым фрагментом, в то время как сайты фосфорилирования P120gag-abl, экстрагированного из клеток, трансформированных A-MuLV, отличались от таковых в системе in vitro [Witte О. N. et al., 1981; Sefton В. M. et al., 1982].

На этом основании предположили, что реакция аутофосфорилирования коррелирует с активностью, существенной для трансформации, и поэтому продукт реакции in vitro мало сходен с той формой и процессом, которые необходимы для опухолевой конверсии in vivo.


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко

← Назад
Вперед →
Популярные статьи разделаПопулярные статьи раздела