Антигены Т и TSTA — продукты онкогенов аденовирусов

Антигены Т и TSTA аденовирусов включают группу ранних белков, синтез которых при продуктивной инфекции предшествует репликации вирусной ДНК, т. е. эти антигены являются ранними белками и их синтез не блокируется ингибиторами синтеза ДНК.

Указанные антигены аденовирусов, так же как и аналогичные белки паповавирусов, синтезируются в процессе абортивной и продуктивной инфекции, а также в трансформированных клетках in vitro и в клетках опухолей, индуцированных in vivo соответствующими вирусами.

Почти весь спектр ранних полипептидов ассоциирован с ядром и прилежащим цитоплазматическим матриксом, TSTA и TSSA локализованы на клеточной поверхности [Агеенко А. И, 1974, 1978; Агеенко А. И. и др., 1982].

Сочетание ингибиторного анализа с использованием набора мутантов аденовирусов по ранним генам, в том числе и онкогена (11 % левой части генома), позволило выявить следующее разграничение ранних генов.

«Немедленные ранние» гены аденовирусов: синтез их продуктов не подавляется никакими из известных ингибиторов, они кодируют белки с молекулярной массой 135 000 и 525 500.

«Предранний» ген оперона Е1А необходим для всего последующего процесса экспрессии, он блокируется анизомицином (подавляет белковый синтез более чем на 99 %). Эти гены кодируют все «стандартные» продукты раннего белкового синтеза аденовирусов, происходящего до репликации вирусной ДНК.

Наконец, «промежуточные» гены, функционирующие также в этот период, оказались наиболее чувствительными к ингибиторам, они кодируют неструктурные и «ложно-поздние» полипептиды, которые включаются в состав вириона.

От поздних белков их отличает способность к синтезу в пписутствии цитозинарабинозида [Lewis J. В. et al., 1980].

Продемонстрировано взаимодействие ранних аденовирусных белков с цитоскелетом. Оно может быть одним из проявлений функции данных белков и может служить основой для вызываемых ими физиологических изменений, оказывающих плейотропное влияние на регуляцию клеточного роста. Вместе с тем механизм действия всех ранних белков аденовирусов практически неизвестен, неясна также и природа многих из этих белков. Естественно, все эти вопросы требуют интенсивного изучения.

Проведена идентификация ранних белков и функций онкогена аденовируса типа 12. На основании результатов этого анализа предполагают, что Т-антиген g (ММ 35 000 — 40 000) ответствен за инициацию, а Т-антиген f (ММ 10 000) — за поддержание трансформации [Shiroki К. et al., 1980]. Т-Антиген g кодируется областью генома А12 0 — 4,7 ед. карты, а Т-антиген f — областью 4,7 — 6,8 ед. карты. Эти данные подтверждаются также трансляцией in vitro мРНК, комплементарной фрагментам EcoRIC и AccIH ДНК А12.

Получены факты, свидетельствующие о том, что Т-антиген f, видимо, вовлечен в Формирование TSTA и TSSA клеточной поверхности. Установлено, что сегмент ДНК А12 EcoR 1С селекционирует мРНК для полипептидов с молекулярной массой 38 000, 40 000 и 10 000, а фрагмент AccIH А12 кодирует только пептиды с массой 38 000 и 40 000 [Segawa К. et al., 1980].

По общности молекулярных масс и изоэлектрических точек это соответствовало: для белков с массой 38 000 и 40 000 Т-антигенам g, а для белка с массой 10 000 Т-антигену f. Показано, что мРНК для Т-антигена g имеет константу седиментации 13S. При обработке нуклеазой gSI обнаружено, что 13S мРНК имеет два подкласса, транслируемых в виде двух полипептидов с молекулярной массой 38 000 и 40 000, относящихся к Т-антигену g.

В последующей работе вирусспецифические мРНК высокоонкогенного аденовируса типа 12 селекционировали (более 20 видов) на различных этапах инфекции путем гибридизации с клонированными фрагментами ДНК вируса А12, после чего анализировали продукты их трансляции в бесклетрчной системе.

В этих условиях мРНК А12, кодируемые фрагментом генома Е1А, направляли синтез полипептидов с молекулярной массой 38 000, 36 000, 30 000, 28 000, 25 000, 24 000, 23 000, имеющих определенную гомологию по пептидным картам [Esche Н., Siegman В., 1982; Saito I. et al., 1983].

Три белка кодировались опероном Е1В: их молекулярная массса 59 000, 19 000 и 17 000. Подобным образом были картированы полипептиды участков Е2А и Е2В; Е2В кодировал ранее мало изученный белок 67 000. При исследовании полипептидов, кодируемых геномом вируса А12 в трансформированных и опухолевых клетках, в них обнаружена экспрессия геномных участков Е1 и Е4.

Вирусные мРНК А12 из трансформированных клеток направляли синтез полипептидов, по спектру очень близких к полипептидам в ранней стадии продуктивной инфекции вирусом А12. В то же время в трансформированных клетках присутствовали белки оперонов Е1 и Е4, не выявляемые в продуктивно инфицированных клетках. Полипептид с молекулярной массой 67 000, картидуемый в положении 11 — 28 ед. карты, не экспрессируется при трансформации, детерминированной вирусом А12.


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко

← Назад
Вперед →