Анализ пептидных карт ранних белков
Анализ пептидных карт ранних белков, а также данные по картированию мРНК, указывают на то, что два ранних оперона Е1А и Е1В содержат перекрывающиеся гены, кодирующие частично связанные мРНК и транслирующие классы ранних перекрывающихся полипептидов. Оперон Е1А аденовируса типа 5 кодирует 5 — 6 перекрывающихся белков с молекулярной массой 34 000, 36 000, 40 000, 42 000, 15 000 и 25 000.
Е1В вируса А5 содержит информацию для двух основных белков (ММ 19 000 и 65 000) и для нескольких минорных белков с массой 17 000, 18 000, 45 000 и 52 000 [Eb A. J. et al., 1980; Rowe D. Т. et al., 1983; Yee S. P. et al., 1983]. Кроме указанных белков вируса А5 N. J. Lassam и соавт. (1980) в трансформированных этим вирусом клетках обнаружили синтез полипептида с молекулярной массой 58 000, который также кодировался онкогеном А5, опероном Е1В.
Представлены данные, позволяющие предполагать, что белок с массой 58 000 является одним из основных полипептидов, которые необходимы для инициации и/или поддержания трансформации. Этот белок кодируется ранней областью Е1В А5, он фосфорилирован и содержит по крайней мере три фосфопептида, полученных после обработки трипсином [Malette P. et al., 1983].
He обнаружено активности цАМФ-зависимой протеинкиназы, связанной с фосфорилированием указанного белка. Не выявлено совпадения подвижности фосфопептидов, полученных в результате фосфорилирования in vitro и in vivo.
Мажорный Т-антиген А5 с молекулярной массой 44 000, кодируемый опероном Е1А, локализуется в трансформированных и литически инфицированных клетках примерно в равных соотношениях во фракциях нуклеоплазмы и цитоплазмы, в последней он ассоциирован как в цитозольной, так и питоскелетных субфракциях. Аналогично распределялся белок с массой 58 000; исключение — его выраженная связь с цистоскелетом.
В поздний период литической инфекции данный белок накапливается в ядре. Т-Антиген А-5 с молекулярной массой 19 000 и взаимосвязанный с ним белок с массой 18 500 преимеущественно обнаруживались в клеточных мембранах, а основной ранний белок с массой 14 000, кодируемый опероном Е4, оказался связанным исключительно с ядром и был единственным Т-антигеном А5, выявляющимся во фракции гистонов [Rowe D. Т. et al., 1983].
Полагают, что этот белок является ядерным и связан с ядерным матриксом. В специальных исследованиях показано, что Т-антигены с молекулярной массой 19 000 и 18 500 кодируются 0 — 8% областью генома А5. Эти полипептиды имеют общую перекрывающуюся аминокислотную последовательность [Rowe D. Т. et al., 1982].
Из данных о первичной структуре ДНК E1 А5 и по картированию мРНК следует что основные Т-антигены, (белки с молекулярной массой 19 000 и 65 000) являются продуктами трансляции двух типов мРНК — соответственно 13,5S и 20,5S. Учитывая различные свойства клеток, трансформированных фрагментами ДНК E1 А5 разной длины, был сделан вывод о том, что оперон Е1А выполняет инициирующую функцию при трансформации и белки, кодируемые Е1А, способны превращать диплоидные клетки с ограниченным временем жизни в «бессмертные» анеуплоидные клетки, которые, однако, не обладают всеми характерными свойствами трансформированных клеток.
В то же время белки, кодируемые Е1В (в частности, белок с массой 19 000), ответственны за индукцию некоторых свойств, присущих трансформированным клеткам. Аналогичные исследования онкогенов аденовирусов типов 3; 7 и 12 показали сходную организацию их трансформирующей области [Eb A. J. et al., 1980].
Существенно, что клетки, трансформированные высокоонкогенным вариантом аденовирусом типа 12, утратившие Т-антиген с массой 19 000, лишались и туморогенных свойств (способность вызывать опухоли при их трансплантации бестимусным мышам и хомякам). Иными словами, разница в онкогенной активности вирусов А5 и А12 определяется, вероятно, природой их белков с молекулярной массой 19 000.
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
