Трансформированные RSV клетки

Определенный интерес представляют комплексы продуктов онкогенов как ДНК-содержащих вирусов полиомы, так и ретровирусов с клеточными фосфобелками с молекулярной массой 48 000 и 55 000. Эти опухоле-ассоциированные белки в клетках, трансформированных химическими канцерогенами, опухолеродными вирусами, а также в спонтанно трансформированных клетках или идентичны, или очень сходны [Maltzman W. et al, 1981; Stitt D. T., Mangel W. F., 1981].

Показано, что белок с молекулярной массой 55 000 является эмбриональным белком, который амплифицируется при трансформации SV40 [Mora Р. Т. et al, 1980]. При более детальном анализе нормальных фибробластов кур обнаружена очень гетерогенная популяция клеточных белков с молекулярной массой 20 000 — 200 000 и выше, содержащих фосфотирозин.

Наибольшее количество белков, фосфорилированных по тирозину (15 % от тотальной метки), определялось во фракции с молекулярной массой 35 000 — 60 000, а наименьшее (0,1 %) — во фракции с молекулярной массой 20 000 — 35 000.

Среди этих белков центральное место занимает белок с массой 34 000, локализованный на внутренней поверхности плазматической мембраны как нормальных, так и трансформированных RSV клеток [Greenberg М. Е, Edelman G., 1983]. Вместе с этим белком очищается другой белок с молекулярной массой 50 000, который является, как считают A. F. Purchio с соавт. (1983), новым субстратом для pp60src.

В трансформированных RSV клетках наибольшее количество фосфотирозина локализовалось в белках с молекулярными массами 40 000 — 50 000 (0,82 %) и 50 000 — 60 000 (0,60 %). Подсчитано, что в трансформированных клетках фосфорилируется 40 — 50 % белка с массой 35 000.

Следовательно, включение ³²[Р] в тирозин в трансформированных клетках значительно выше по сравнению с таковым в нормальных фибробластах, однако в принципе распределение фосфотирозина практически одинаковое [Brugge J. S, Darraw D, 1982; Decker S., 1982].

Преобладание фосфотирозина во фракциях клеточных белков, молекулярная масса которых соответствует массе продуктов онкогенов, было обнаружено и в других системах: клетки, трансформированные вирусом PRCII (ММ в пределах 100 000 — 150 000, 0,7%), а также клетки крыс и норки, трансформированные GA-FeSV и ST-FeSV (ММ 80 000 — 115 000), причем белки из клеток норок и крыс были сходны по фосфопептидной структуре [Van de Ven W. et al, 1980].

Итак, в клетках, трансформированных RSV, кроме аутофосфорилирования самого онкобелка, определяется более 10 гетерогенных белков-мишеней протеинкиназы pp60src, фосфорилирование которых осуществляется по тирозину, т. е. вирусспецифическая киназа обладает плейотропным эффектом.

Помимо белков с молекулярной массой 36 000, 48 000 и 55 000, играющих, как предполагают, ключевую роль в трансформации клеток, не менее важное значение, вероятно, имеют фосфорилирующиеся по тирозину белки цитоскелета. Установлено, что в клетках, трансформированных RSV, фосфорилируется 1 % молекул виментина и филамина, а уровень фосфотирозина в винкулине увеличивается в 5 — 10 раз по сравнению с таковым в нормальных клетках, при этом одновременно уменьшается общее содержание фосфата.

Значительное повышение фосфорилирования винкулина по тирозину характерно для клеток, трансформированных не только RSV, но и A-MuLV и Y73. Помимо винкулина, еще два клеточных белка с молекулярной массой 29 000 и 36 000 являются субстратами для протеинкиназы трансформирующего белка P120gag-abl продукта онкогена abl A-MuLV [Sefton В. М. et al, 1983].

В то же время в клетках, трансформированных различными химическими канцерогенами и SV40, уровни фосфотирозина в винкулине были такими же, как и в нормальных клетках. Другие белки цитоскелета (филамин, α-актинин, тяжелые цепи миозина и виментин) в трансформированных клетках содержали незначительные количества фосфотирозина [Sefton В. М. et al, 1981, 1982].

Предполагают, что фосфорилирование винкулина по тирозину может служить причиной нарушения структуры цитоскелета, прикрепления (поскольку винкулин главным образом локализуется в бляшках адгезии и участвует в прикреплении клеток к субстрату) и клеточной морфологии, что собственно и определяет основные признаки трансформации.

Вместе с тем однозначно ответить на принципиально важные вопросы, а именно: какую функциональную роль играет фосфорилирование по тирозину в трансформации клеток и собственно какие белки (цитоскелета или регуляторные) являются основными мишенями вирусных фосфопротеинкиназ пока, к сожалению, нельзя.

«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко

Популярные статьи раздела