Бляшки адгезии
Существенно важным является факт обнаружения иммунофлюоресцентным методом pp60src в клеточных структурах, обусловливающих присоединение клеток к субстрату (бляшки адгезии), а также в структурах, осуществляющих межклеточный контакт (бляшки контакта).
Этим же методом внутри бляшек адгезии и контакта идентифицированы белки цитоскелета (актин, α-актинин, винкулин и фимбрин), но не выявлены тубулин и промежуточный белок с молекулярной массой 58 000 [Shriver К-, Rohrschneider L. R., 1981]. Причем эти белки оказались идентичными как в цельных клетках, так и в изолированных структурах.
Эти результаты принципиально важны для определения природы белков — субстратов возможного действия рр60src-фосфопротеинкиназы, а также для расшифровки механизма трансформации. Не меньший интерес представляют данные о пространственной локализации указанных белков в бляшках контакта и адгезии.
Белок pp60src располагается, как правило, в непосредственной близости от цитоплазматической стороны каждой связывающей мембраны, вследствие этого возникающая межклеточная щель всегда слишком узкая для того, чтобы можно было определить в ней иммунофлюоресцентным методом какие-либо белки.
Основные белки микрофиламентов (актин и α-актин), так же как и фимбрин, занимают широкую область, соседствующую с pp60src, но отсутствуют в участках, пограничных с мембранами контакта. Винкулин в отличие от других белков микрофиламентов распределяется в виде узкой полосы на фиксированном расстоянии с каждой стороны мембраны. В изолированных бляшках адгезии и контакта содержится киназная активность, ассоциированная с pp60src.
Используя ts-мутанты RSV, имеющие делецию в гене src, была предпринята попытка разобщить процессы внутри бляшек адгезии и определить их роль в трансформации. Установлена корреляция между температурой инкубации и активностью pp60src.
Однако, если функционирование гена src в трансформированных фибробластах кур при разрешающей температуре обусловливало изменение структуры актинсодержащих пучков в микрофиламентах и микротрубочках, то в трансформированных RSV клетках млекопитающих изменялась только структура микрофиламентов.
При пермиссивной температуре pp60src мутантов ts-CUIIRSV и ts-NY68RSV активен, локализуется в бляшках адгезии, винкулин в этих бляшках содержит большее количество фосфотирозина, количество фибронектина резко снижено и структурные нити не обнаруживаются.
Напротив, при непермиссивной температуре, когда pp60src не активен и структурные нити интактные, винкулин содержит нормальное количество фосфотирозина и фибронектин присутствует на клеточной поверхности в нормальных количествах.
Противоположная картина наблюдалась в случае клеток, инфицированных ts-мутантом CU12RSV. В бляшках адгезин этих клеток pp60src отсутствовал, но содержание фосфотирозина было характерно для трансформированных клеток. Структурные нити в этих клетках оказались диссоциированными, а уровень фибронектина был нормальным [Rohrschneider L. et al, 1982].
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
