Продукт независимого онкогена ras вирусов

Вторым продуктом независимого онкогена ras вирусов Ki-MSV и Ha-MSV является р21, существенно отличающийся от pp60src. Во-первых, р21 не выявлялся сыворотками от животных с опухолями, индуцированными этими вирусами. Для этой цели необходимо было иммунизировать животных клетками, трансформированными Ki-MSV, но не продуцирующими вирус, или получить моноклональные антитела к p21 [Furth М. Е. et al., 1982]. Во-вторых, в отличие от pp60src белок p21ras синтезируется через стадию предшественника (прото-р21).

В трансформированных Ha-MSV клетках идентифицировано две формы р21: фосфорилированная p21ras и нефосфорилированная — предшественник этого белка прото-р21, молекулярная масса которого на 1000 больше, чем у p21ras.

Этот предшественник синтезируется в цитоплазме в свободной цитозольной фракции клеточных гомогенатов, затем превращается в зрелый р21, который мигрирует на внутреннюю поверхность плазменной мембраны, ассоциируясь с ней [Shih Т. J. et al., 1982]. Процессинг прото-р21 в р21 сопровождается изменениями в структуре пептидов, локализованных на СООН-конце молекулы р21, и протекает за 4 ч.

Для накопления в мембране pp21ras требуется 24 ч. Установлено, что аминокислоты на С-конце р21 необходимы для трансформации клеток, ассоциации с мембранами и связывания липидов [Willumsen В. М. et al, 1984].

Белок p21ras способен связывать гуаниннуклеотиды (ГТФ и ГДФ), но не АТФ или другие пиримидиновые нуклеотиды. Кроме того, p21ras Ha-ras обладает уникальной аутофосфорилирующей активностью по треониновым остаткам, используя в качестве донора ГТФ. В зараженных клетках этот белок высокофосфорилирован.

Проведено сравнительное исследование сайтов фосфорилирования p21ras Ha-MSV in vivo и in vitro. По данным фингерпринтного анализа триптических гидролизатов, фосфорсодержащие пептиды у обоих белков идентичны, причем установлено, что непосредственным донором 32[Р] в реакции in vitro является ГТФ и фосфорилирование в обоих случаях идет по треонину. При обработке p21ras трипсином или папаином в его составе идентифицирован лишь один фосфопептид. Сайты фосфорилирования в p21ras вирусов Ha-MSV и Ki-MSV оказались сходными [Shih Т. et al, 1982; Kamata Т, Feramisco J, 1984].

В составе последовательностей, кодирующих трансформирующий белок, идентифицировано три потенциальные открытые рамки считывания, которые инициируются в разных участках, но терминируются одним и тем же кодоном [Dhar W. et al, 1982]. Соответственно должны существовать, как полагают, три вида белка, которые имеют общий СООН-конец, но отличаются по размеру 1МН2-конца.

Указанные рамки считывания должны обеспечивать синтез трех белков: р21, р29 и р30. Два из этих белков (р21 и р30) обнаружены в трансформированных клетках (р30 выявляется в очень небольших количествах и в определенных условиях), р29 обнаружить пока не удалось. Для всех трех белков инициирующим кодоном является АТГ в позиции 185 (для р30), 224 (для р29) и 341 (для р21).


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко

← Назад