Получение экстрактов с помощью заражения бактерий мутантными формами бактериофага Т

Заражая бактерии мутантными формами бактериофага Т4, несущими повреждения в тех или иных генах, контролирующих процесс сборки, мы получили 40 различных экстрактов, в которых содержались компоненты фага, но не было полноценных инфекционных частиц. Эти экстракты мы сливали попарно в разных комбинациях. В одних случаях наблюдалось формирование активных фаговых частиц, тогда как в других никакой активности заметить не удавалось. Появление инфекционных фаговых частиц указывало на то, что два испытываемых экстракта в некотором смысле дополняют друг друга: недостающие или в чем-то непригодные компоненты одного экстракта обязательно есть в другом. Такие пары экстрактов мы назвали комплементарными. С другой стороны, отсутствие активности означало, что в обоих экстрактах не хватает одного и того же компонента. Анализируя все положительные и отрицательные результаты, мы могли убедиться, с каким множеством функциональных компонентов приходится иметь дело.

Оказалось, что существует по меньшей мере 13 таких компонентов. Иными словами, перебирая все комбинации, мы получили 13 групп комплементации: экстракты, относящиеся к одной группе, не комплементарны друг другу, но зато комплементарны любому экстракту всех остальных групп. Две группы комплементации оказались довольно большими. Поскольку один ген определяет один белок, а в разных экстрактах содержатся различные дефектные генные продукты, в смеси двух экстрактов должны присутствовать все белки, необходимые для формирования частиц бактериофага. Тот факт, что экстракты, принадлежащие к любой из двух больших групп, не комплементарны друг другу, может быть связан с тем, что наша экспериментальная система менее эффективна, чем зараженная клетка; каковы бы ни были функции недостающих генных продуктов в каждом из этих экстрактов, в пробирке они эти функции выполнять не могут.


Схема эксперимента, в котором получают целые инфекционные фаговые частицы
в результате присоединения хвостовых нитей к частицам,
уже содержащим все остальные компоненты

схема эксперимента, в котором получают целые инфекционные фаговые частицы в результате присоединения хвостовых нитей к частицам, уже содержащим все остальные компоненты

Здесь представлена схема эксперимента, в котором получают целые инфекционные фаговые частицы в результате присоединения хвостовых нитей к частицам, уже содержащим все остальные компоненты. Клетки заражают мутантным фагом (слева), утратившим способность образовывать хвостовые нити. Потомство такого фага состоит из частиц, лишенных хвостовых нитей; эти частицы отделяют путем центрифугирования. Другую бактериальную культуру заражают фагом, неспособным к формированию головок (справа). Полученный из этих клеток препарат содержит не соединенные друг с другом хвосты и хвостовые нити. После того как оба препарата сливают вместе и выдерживают при температуре 30®, образуются полноценные инфекционные фаговые частицы.


Схема комплементации

Схема комплементации



«Молекулы и клетки», под ред. акад. Г.М.Франка