Вопрос о специфичности участков клеточной ДНК
Вопрос о специфичности участков (мест) клеточной ДНК, в которые должны встроиться вирусные ДНК-копии с тем, чтобы вызвать трансформацию, исследован явно недостаточно. Можно предполагать, как уже отмечалось, что интеграция вирусного генома при продуктивной инфекции в основном, по-видимому, происходит в повторяющиеся последовательности хромосомной ДНК в S-периоде клеточного цикла.
Данный процесс неспецифичен, так как при этом может обнаруживаться до 20 000 копий и более ДНК SV40 в генетическом аппарате клетки [Volpe P., Eremenko Т., 1983].
В то же время интегративная рекомбинация при трансформации, вероятно, относительно специфична, осуществляется в ограниченное число участков (пока они точно не картированы) и количество вирусных ДНК-копий в этом случае в среднем составляет 1 — 10 в расчете на диплоидный геном.
Получены данные о том, что трансформированные SV40 клетки человека содержат вирусный геном в хромосомах 7; 17 или 5 [Hwang S, Kucherlapati R., 1980]. Интегрированные вирусные последовательности перемежаются клеточными участками. С помощью одновременного воздействия разными рестриктазами показано, что последовательности, находящиеся внутри вирусного генома, в каждом случае различаются.
Какая-либо специфичность интеграции генома SV40 в клетках человека отсутствует, хотя отмечена преимущественная локализация на длинном плече хромосомы 7 в одном и том же положении 7q31 [Rabin М. et al., 1984]. В клетках крыс и хомяка обнаружено 1 — 5 мест интеграции SV40 [Chepelinsky А. В. et al., 1980].
Выявлены как единичные копии, так и тандемные повторы последовательностей SV40. В клетках мышей, трансформированных SV40, интеграция ДНК SV40 также была неспецифичной, хотя в клетках некоторых линий вставки вирусной ДНК очень близки по составу нуклеотидных последовательностей. В подавляющем большинстве исследованных линий вставки вирусной ДНК были в виде тандемных дупликаций геномов.
Показано, что клетки клонов, полученных от одной опухоли (опухоль мозга хомяка, индуцированная паповавирусом человека JC), содержали разное число копий вируса (4 — 5 или 9 — 10) на клетку, причем, по-видимому, каждый из геномов был представлен полной копией [Wold W. S. et al., 1980].
В исследованных клональных линиях множественные копии интегрируют тандемно путем соединения «голова — хвост». В клетках вирусная ДНК обнаружена только в ассоциации с хромосомной ДНК. Клетки каждой клональной линии содержали множественные независимые участки для интеграции вирусной ДНК.
Участки интеграции клеточного и вирусного геномов различны в клетках каждого клона. Таким образом, хотя клоны были получены из одной и той же опухолевой клеточной линии, они отличались как по количеству копий вирусной ДНК, так и по характеру распределения этих последовательностей.
С помощью рестрикционного анализа ДНК клеток человека и последующей блот-гибридизации выявлены множественные нормальные и дефектные копии тандемно интегрированной ДНК SV40. Такой же анализ нескольких гибридных линий показал, что характер интеграции в них вирусных последовательностей очень сходен, но не всегда идентичен [Hwang S, Kucherlapat R, 1983].
На основании полученных данных предполагают, что после первой стадии интеграции вирусные, а также фланкирующие клеточные последовательности становятся нестабильными и подвергаются делециям и перестройкам. Этот недолгий период структурной нестабильности сопровождается высокостабильным состоянием интеграции, которая сохраняется в этих клетках, а также в их гибридах на протяжении сотен клеточных генераций.
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
