Транскрипция Т-А-антигена

Предполагают, что Т-А-антиген транслируется с помощью мРНК, образованной в результате сплайсинга («сшивания»), вследствие которого ковалентно соединяются РНК-последовательности, транскрибируемые с разных участков гена А.

Иными словами, непрерывная транскрипция мРНК для Т-А-антиген с области гена А не происходит, поскольку списывание информации прерывается в терминирующих триплетах вокруг точки 0,545 ед. карты генома SV40 (эта область соответствует hr-t-мутации вируса PY), т. е. около 25 % ранней области вирусного генома не кодирует большой Т-антиген.

Установлено, что на ранней стадии литической инфекции и трансформированных клетках синтезируется три класса вирусных мРНК, транскрипция которых начинается в общей для них точке 0,67 ед. карты. 5´-Конец одной и, по-видимому, другой мРНК картированы в области 0,66 ед., вблизи от участка начала репликации ДНК, а З´-концы обеих молекул мРНК — в участке 0,16 ед. карты. Интроны, удаляющиеся из мРНК в процессе «сшивания», локализуются для одной мРНК в области 0,585 — 0,53 и для другой — 0,535 — 0,53 ед. карты. Сегмент для малого t-антигена находится в районе 0,535 — 0,6 ед. карты [Thimmappaya В., Shenk Т., 1979].

Таким образом, три главных ранних белка паповавирусов транслируются близкими, но по-разному сплайсируемыми мРНК. Причем в трансформированных клетках инициация транскрипции и сплайсинг мРНК осуществляются так же, как и в литически инфицированных клетках.

В клетках, трансформированных вирусом PY, обнаруживаются мРНК, способные кодировать средний и малый Т-антигены, но не всегда — большой, который, вероятно, не является необходимым для поддержания трансформации [Kamen R. et al., 1980].

Существенно, что в геномах паповавирусов на расстоянии 100 — 200 нуклеотидов от 5´-конца транскрибируемой РНК локализованы области промотора — усиливателя, влияющие на эффективность транскрипции [Cereghini J. et al., 1983]. Интересно, что эта усиливающая функция может осуществляться даже на расстоянии нескольких тысяч оснований от клеточного промотора.

С помощью электрофореза в полиакриламидном геле и ионнообменой хроматографии с использованием метода фингерпринтирования Т-антигенов вируса PY было показано, что большой и малый Т-антигены имеют 5 — 7 общих пептидов. Средний и малый Т-антигены содержат 2 пептида, которые отсутствуют в большом Т-антигене. Далее было установлено, что большой и малый Т-антигены SV40 обладают одной общей антигенной детерминантой и одной уникальной.

С помощью антисывороток, содержащих только антитела против уникальных антигенных детерминант, удалось выявить, что общие антигенные детерминанты локализованы на NH2-концax, а уникальные — на С-концах большого и малого Т-антигенов [Greenfield R. S. et al., 1980]. На основании всех представленных данных можно предполагать, что три формы Т-антигена имеют общий NH2-конец, кодируемый в зоне 0,65 — 0,59 ед. генетической карты SV40, но разные СООН-концы. Уникальный полипептид малого t-антигена кодируется в зоне 0,59 — 0,54 ед. карты [Martin R. G. et al., 1979].

Анализ свойств набора Т-антигенов у различных hr-t-мутантов PY показал, что у всех этих вирусов синтезируется нормальный большой Т-антиген, но наблюдаются разные изменения в структуре малого (ММ 22 000) и среднего (ММ 56 000) Т-антигенов [Benjamin Т. L. et al., 1980].

Результаты исследований свойств малого и среднего Т-антигенов полученных мутантов подтверждают, что белки с молекулярной массой 22 000 и 56 000 являются перекрывающимися продуктами экспрессии района hr-t гена А. Оба белка имеют общий NH2-концевой фрагмент из 79 аминокислот (общий с большим Т-антигеном). Следующие 112 аминокислот относятся к собственно зоне hr-t и являются общими для малого и среднего Т-антигенов.

Особое значение имеет последовательность от 8-го до 34-го аминокислотного остатка, которая постоянно присутствует во всех гликопротеидных гормонах гипофиза и обнаружена также в одном из белков паповавируса человека ВК. С этой последовательностью связывают влияние вируса на микрофиламенты цитоскелета и морфологию клетки. Средний Т-антиген отличается от малого тем, что содержит 230 дополнительных аминокислот.

В этой последовательности интерес представляют три основных фрагмента:

  1. домен, обогащенный пролином;
  2. гидрофобный «хвост», состоящий из 22 остатков и выполняющий функции «мембранного якоря»;
  3. 2 блока кислых аминокислотных остатка, фланкирующих гидрофобный домен.


«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко

← Назад
Вперед →