Радиоконкурентный микроанализ

Радиоконкурентный микроанализ состоит из 4 основных этапов.

Смотрите рисунок — Принципиальная схема радиоконкурентного микроанализа (in vitro)

Первый этап — смешивание исследуемой пробы с реагентами набора индикаторов, содержащего антитела и меченый антиген. Антитела должны быть строго специфичны к исследуемым антигенам, т. е. очень мало или совсем не реагировать с близкими по структуре молекулами других веществ (например, гормонами той же группы или их метаболитами).

Меченый антиген должен быть идентичен исследуемому антигену, обладать прочной меткой и высокой удельной активностью (до 4,0 МБк/мг), причем содержание радиоактивной метки должно быть таким, чтобы вещество не утратило иммунных свойств. Подходящим для метки оказался ¹²⁵I, обладающий мягким гамма-излучением и довольно большим периодом полураспада (Т_1/2=60 дней). Если йод нельзя использовать для метки, в частности при исследовании стероидов, применяют тритий (T_1/2= 12 лет). Тритий — чистый бета-излучатель с максимальной энергией частиц в 17 кэВ.

Второй этап — инкубация. В этот период после смешивания исследуемой пробы с реагентами из набора происходит реакция антиген — антитело до достижения состояния подвижного равновесия. Условия инкубации должны способствовать основной реакции и максимально противодействовать побочным реакциям, которые могут затушевать специфичность пробы. Обычно пользуются кратковременной инкубацией при температуре 4° С.

Третий этап — разделение свободного и связанного радиоактивного вещества. Комплекс антиген — антитело отделяют от реагентов, находящихся в свободном состоянии. Для этого применяют различные сорбенты (активированный уголь, ионообменные смолы) или методы разделения (хроматография, преципитация, диализ и др.).

Четвертый этап — радиометрия. Ее проводят в специальном счетчике с автоматической сменой образцов, обеспечивающей обработку большого количества проб (100—200). В качестве детектора используют колодезный счетчик для радиометрии ¹²⁵I или жидкостный сцинтилляционный счетчик (при радиометрии трития).

Результаты радиометрии сопоставляют с эталонной кривой, полученной в результате анализа со стандартным содержанием искомого вещества из набора реагентов.

Результаты конкурентного анализа могут быть выражены отношением:

связанной фракции к свободной;
связанной фракции к общей примененной радиоактивности;
связанной фракции исследуемой пробы к связанной фракции при нулевой концентрации нерадиоактивного антигена.

Радиоиммунологические методы применяют для исследования около 400 биологически активных веществ — гормонов гипофиза, щитовидной железы, надпочечников, поджелудочной железы, плаценты, витаминов и их носителей, простагландинов, гастрина, раково-эмбрионального антигена, α₁-фетопротеина (для диагностики первичного рака печени), ревматоидного фактора.

С помощью радиоиммунологического метода изучают антитела при сальмонеллезе, шигеллах, холере, исследуют австралийский антиген, определяют содержание в организме лекарственных препаратов (дигитоксина, морфина и др.).

«Медицинская радиология»,
Л.Д.Линденбратен, Ф.М.Лясс

Популярные статьи раздела