В разделе Молекулярная биология и генетика онкогенов ретровирусов и их гомологов в нормальных клетках наряду с материалом об онкогенах ретровирусов приводились данные об их клеточных гомологах. Особый интерес, естественно, представляют исследования, посвященные анализу экспрессии этих последовательностей в нормальных клетках и выявлению в этих же клетках их продуктов, родственных вирусным онкобелкам.
Для обнаружения клеточных гомологов обычно используют сыворотки, которые применяются и для определения вирусных онкобелков. К настоящему времени таким способом были идентифицированы многие клеточные белки, гомологичные продуктам вирусных онкогенов, например pp60src RSV, P140gag-fps FSV, P45gag-myb AMV, P135gag-myb-ets E26, P120gag-abl A-MuLV, pp55fos вируса остеосаркомы мышей, p21ras вируса саркомы Харви и Кирстен. и P110gag-fes вируса саркомы кошек.
Из всех перечисленных клеточных гомологов вирусных онкобелков наиболее всесторонне изучен pp60c-src, который, как считают, по всем известным в настоящее время критериям идентичен вирусному pp60v-src [Purchio A. F. et al., 1981; Smart J. E. et al., 1981].
Правда, сыворотка против синтетического пептида (синтезированный СООН-конец, полностью соответствующий СООН-концу pp60src, через дополнительный тирозин на NH2-конце соединен с бычьим сывороточным альбумином) осаждала pp60c-src из лизатов трансформированных клеток и не осаждала из нормальных клеток кур [Sefton В. М., Walter G., 1982].
На этом основании предположили, что клеточный продукт c-src может отличаться от продукта вирусного v-src по карбоксильному СООН-концу. По данным фингерпринтного анализа, в нормальных клетках птиц и млекопитающих обнаруженный гомолог pp60c-src сходен, но не идентичен вирусному pp60v-src [Erikson Е., 1981]. Эти отличия связаны с перестройками гена src, происходящими во время или после трансдукции [Parker R. С. et al., 1984].
Клеточный pp60c-src так же, как и его вирусный гомолог, обладает фосфопротеинкиназной активностью и может фосфорилироватъ по тирозину гетерогенные субстраты (казеин и белок с молекулярной массой 36 000 — одна из возможных мишеней вирусного pp60v-crs). Добавление к pp60c-src, очищенному путем иммуноаффинной хроматографии, 32[Р]-γ-АТФ приводило к появлению меченого в результате аутофосфорилирования клеточного pp60c-src. Причем мишенью аутофосфорилирования in vitro также был тирозин, локализованный в СООН-области молекулы в положении 419.
Если pp60v-src и pp60c-src обрабатывали протеазой V8, то образовывалось два фрагмента: NH2-концевой (ММ 36 000) и СООН-концевой (ММ 28 000). Более сложная картина наблюдалась, если анализу подвергался pp60c-src, меченный 32[Р] in vivo. Фосфопептиды из NH2-фрагмента были идентичны таковым из pp60v-src, в то время как в СООН-фрагменте у pp60c-src оказалось большее количество фосфорилированных пептидов [Purchio A. F. et al., 1981; Smart J. E. et al., 1981]. На этом основании предполагают, что фосфорилирование пептидов в pp60src в нормальных и трансформированных клетках контролируются разными механизмами.
Установлено, что содержание pp60c-src в нормальных клетках в 100 — 150 раз меньше, чем в опухолевых клетках, а также значительно снижена реакционная способность фосфопротеинкиназ на единицу pp60src. Обычно инфекция полным RSV сопровождается интеграцией нескольких копий вирусного генома с хромосомной ДНК, но при этом более чем в 100 раз увеличивается количество вирусспецифической РНК и вследствии этого происходит соответствующее повышение количества pp60src [Karess R. Е. et al., 1979; Parker R. C. et al., 1984].
Молекулярная масса клеточного гомолога трансформирующего белка FSV составляет 98 000. Этот белок обладает фосфопротеинкиназной активностью и способен к аутофосфорилированию по тирозину; из гетерогенных субстратов может фосфорилировать α-казеин. Большинство пептидов клеточного гомолога оказалось родственными пептидами P140gag-fps FSV.
Экспрессия этого белка, как и других клеточных гомологов вирусных онкобелков, была существенно выше в клетках более молодых тканей. Если, например, принять экспрессию P98c-fps в клетках костного мозга на 9-й день жизни цыпленка за 100%, то 38% от этого количества синтезируется в печени (причем не изменяется к 60-му дню), 35% — в легких, 27% — в селезенке и 10% в сумке Фабрициуса [Lee W. Н. et al., 1981; Mathey-Prevot B. et al., 1982].
Эти данные согласуются с приведенными выше предположениями об определенной функциональной роли онкогенов и их продуктов в дифференцировке и процессах развития организма.
«Онкогены и канцерогенез», А.И.Агеенко
